内容摘要:
原位杂交天1. 重新水化和固定1) 吸取固定好的胚胎,加入50%的PBST溶液,放置5分钟。2) 置换成30%的PBST溶液,放置5分钟3) 置换成PBST溶液,放置5分钟,重复一次4) 置换成4%多聚甲醛的PBS溶液固定20分钟5) 用PBST洗两次,每次放置五分钟,室温。蛋白酶处理与后固定(本实验不做此步)1) 用10ul/ml的蛋白酶K在室温下处理胚胎。5体节以下的胚胎不处理,5体节到24小时的胚胎处理3分钟,24小时以上的胚胎处理5分钟或者更长。发育时间越短的胚胎越嫩,可以不用或者少用蛋白酶处理,发育时间长的胚胎就需要用蛋白酶来疏松组织,以便于杂交。2) 用PBST溶液轻洗,在PBST中放置5分钟。3) 用4%多聚甲醛的PBS溶液固定20分钟,植物原位杂交,室温。4) 用PBST洗两次,每次放置五分钟,室温。2. 预杂交1)每个管中置换成大约300ulHYB-溶液,60℃......
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