内容摘要:
大鼠主动脉内皮细胞的分离培养方法:分离大鼠主动脉,直接贴壁于培养皿中,荧光倒置显微镜观察细胞形态,免yi组化Ⅷ因子相关抗原染色鉴定细胞.结果:约24小时组织块边缘有游离的 新生细胞长出,7天即融合成片.消化传代后细胞呈短梭形或三角形,单层生长,铺路石状,Ⅷ因子表达阳性,呈指数增殖.冻存后复苏细胞活性均超过90%.结 论:用贴壁法成功建立了大鼠血管内皮细胞体外培养方法,流式细胞,冻存细胞存活率高,为体外研究提供了稳定的模型. 关于细胞冻存的注意事项:1. 为保持细胞大存活率,一般都采用慢冻存融的方法。2. 冻存物距液氮面越近温度越低。标准的低冻速度为-1℃~12℃/ 分钟,当温度下降达-25℃时,下降速度可增至-5~-10℃/ 分钟,广元细胞,到-100℃时则可迅速冻入液氮中。因此要适当掌握冻存物下降入液氮中的速度,细胞系,过快能影响细胞内水分透出,太慢则促冰晶形成。3. 初次......
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