内容摘要:
RNA提取及注意事项研究基因的表达和调控时,需要从组织或细胞中分离纯化RNA。RNA质量的高低经常影响RT-PCR、cDNA库构建和Northern Blot等分子生物学实验的成败。主要试剂Trizol是一种新型总RNA抽提试剂,内含异硫酸胍等物质,能迅速破碎细胞,抑制细胞释放出的核酸酶。1.Trizol试剂含有,具有毒性和刺激性,注重操作。2.RNase污染的主要来源是操作过程中手和空气中的浮沉,注重配带手套,样品尽可能盖严。3. 细胞裂解必需充分且操作迅速。裂解不完全会降低后得率,因为一部分RNA会残留在未裂解的细胞中。细胞裂解之后要看不见颗粒状物质(结缔组织和骨除外)。在清洗和裂解细胞时在低温下操作,湖州pcr,防止在操作过程中释放的内源RNase降解了RNA。4. 酵母和一些细菌由于细胞壁的特别结构,pcr引物设计,可以加入Trizol试剂同时加入无RNase的玻璃珠并剧烈......
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