内容摘要:
平板克l隆形成实验基本步骤::1、取对数生长期的各组细胞,分别用0.25%胰 蛋白酶消化并吹打成单个细胞,并把细胞悬浮在10%胎牛的DMEM培养液中备用。2、将细胞悬液作梯度倍数稀释,每组细胞分别以每皿50、100、200 个细胞的梯度密度分别接种含10mL 37预温培养液的皿中,并轻轻转动,使细胞分散均匀。置37团5% CO2及饱和湿度的细胞培养箱中培养2~3周。3、经常观察,细胞实验外包公司,当培养皿中出现肉眼可见的时,终止培养。弃去上清液,用PBS小心浸洗2次。加4%多聚甲醛固定细胞5mL固定15分钟。然后去固定液,加适量GIMSA应用染色液染10~30分钟,然后用流水缓慢洗去染色液,空气干燥。4、将平皿倒置并叠加一张带网格的透明胶片,用肉眼直接计数,或在显微镜(低倍镜)计数大于10个细胞的数。后计算形成率。形成率= (数/接种细胞数) x平板形成试验方法简单,适用于贴壁生长......
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