内容摘要:
GaMYB2 在洋葱表皮细胞中的瞬时表达分析:采用基因轰击的方法,用包裹质粒的金粉对洋葱表皮进行轰击,暗培养过夜后,在激光共聚焦显微镜下进行观察,蛋白亚细胞定位,从图A 中可以看出对照GFP空载体在整个洋葱细胞均能看到绿色荧光,为组成型表达;从图B 中发现GaMYB2-GFP 的融合表达载体只能在细胞核中能看到绿色荧光,亚细胞定位公司,这进一步证明该蛋白不具有跨膜蛋白结构,定位在细胞核中,具有转录因子的一般特征。 亚细胞定位操作步骤1、通过一些在线网站预测亚细胞定位2、亚细胞定位载体构建(1)引物设计:利用引物设计软件,根据pEGP-MCS-N1或pEGP-C1-MCS的酶切位点设计目的基因引物。(2)载体构建:将PCR产物酶切后插入pEGP-MCS-N1或pEF-C1-MCS,得到表达目的基因与EGP融合蛋白质的真核表达载体。3、细胞转染当细胞生长到对数生长期时,接种到共聚焦显微镜的玻璃......
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