内容摘要:
20.Primer设计的基本原则是什么?答:引物设计的下列原则供您参考。◆引物长度一般在18-35mer。◆G-C含量控制在40-60%左右。◆避免近3'端有酶切位点或发夹结构。◆如果可能避免在3'端5个碱基有2个以上的G或C。◆如果可能避免在3'端1个碱基为A。◆避免连续相同碱基的出现,特别是要避免GGGG或更多G出现。◆退火温度Tm控制在 58-60C 左右。◆如果是设计点突变引物,突变点应尽可能在引物的中间。21.为什么引物的OD260/OD280小于1.5 ?答:引物应该全是DNA,但是OD260/OD280的比值为什么那么低,怎么会有蛋白质污染?引物化学合成,哪里有机会污染到蛋白质?需要指出的是OD260/OD280的比值不能用来衡量引物的纯度。OD260/OD280的比值过低一般是由于引物中C/T 的含量比较高所致。下表是一个20mer 同聚体引物的OD260/OD28......
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