内容摘要:
蛋白质双向电泳实验流程1.三氯yi酸-bing酮沉淀法提取蛋白2.双向电泳分离待测样品(1)一相等电聚焦前处理按照所用仪器的厂商提供操作手册进行。蛋白质上样浓度不要超过10mg/mL,pcr,否则会造成蛋白质的聚集或沉淀。(2)等电聚焦完毕后(约需24hr),若不立即进行第二相电泳,胶条可夹在两层塑料薄膜中于-70℃保存数月。(3)等电聚焦好的胶条按厂商提供的操作手册平衡两次。平衡完毕后,于电泳仪上用12.5%SDS-PAGE凝胶进行电泳分离。仪器设置为2.5W/胶 45min,15W/胶 5-8hr,pcr引物设计,20℃。3.银染法对凝胶进行染色(1)固定(2)清洗(3)增敏(4)清洗(5)染色(6)清洗(7)显影(8)定影(9)水洗3.凝胶扫描及图像分析(1)图像扫描:凝胶染色后采用Image scanner以300dpi,16-bit模式(65536灰阶)进行扫描。(2)图......
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