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内容摘要：
亚细胞定位操作步骤1、通过一些在线网站预测亚细胞定位2、亚细胞定位载体构建（1）引物设计：利用引物设计软件，根据pEGP-MCS-N1或pEGP-C1-MCS的酶切位点设计目的基因引物。（2）载体构建：将PCR产物酶切后插入pEGP-MCS-N1或pEF-C1-MCS，得到表达目的基因与EGP融合蛋白质的真核表达载体。3、细胞转染当细胞生长到对数生长期时，接种到共聚焦显微镜的玻璃底培养皿（35mm petri dish，10 mm Microwell）中，培养过夜。当细胞贴壁率达到30%~50%时，将融合绿色荧光蛋白GFP的重组载体质粒和目标细胞器质粒共转染细胞。37℃孵箱培养24~72h。4、激光扫描共聚焦显微镜观察将上述细胞分别在24、36、48、72h的时间点，蛋白亚细胞定位，根据实验需求选择对应激发波长（常用405nm、488nm和561nm），使用共聚焦显微镜观察，亚......
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