内容摘要:
细胞实验介绍——慢病毒建立稳转细胞系慢病毒包装:公司使用3质粒慢病毒包装系统,慢病毒系统使用pLKO.1-EGFP、psPAX2、pMD2.G,过表达慢病毒系统使用pLVX-AcGFP、psPAX2、pMD2.G三质粒系统,细胞实验外包公司,将质粒混匀后使用磷酸钙转染方法转染至HEK293T细胞中,培养48h后,收集上清。使用genecopo公司慢病毒颗粒纯化试剂盒将慢病毒纯化。纯化后留取部分检测病毒滴度,其余病毒冻存于-80℃冰箱中。滴度检测:将病毒颗粒使用梯度稀释,细胞实验外包哪家好,分别293T细胞,72h后,在荧光显微镜下观察细胞荧光表达情况。根据细胞荧光量计算病毒滴度。细胞:在病毒天对细胞进行计数,接种约10000个细胞于12孔板中,培养过夜后使用无培养基稀释病毒,加入12孔板中对细胞进行,病毒数量根据推荐细胞的MOI加入(若无推荐MOI,需做病毒梯度:1,5,10,50......
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