1. 包被N、C膜的抗原浓度对试验结果影响较大。多以蛋白质含量500～1000μg/ml为宜。浓度过高可出现假阳性，过低则降低试验的敏感性。2. 酶结合物浓度对试验成功与否至关重要。适浓度常与包被抗原浓度有关，应根据试验具体条件作方阵滴定来确定。3. 显色时间，一般认为5-10分钟较好。显色时间过长常导致本底着色加深，降
