实际操作时需要注意的是，虽然共价偶联的方法优于物理吸附，但基于氨基和羧基的抗体固定方法仍具有一定程度的随机性，有时在Fab区（用于结合抗原）存在易于修饰的氨基/羧基，在与固体表面偶联后会造成抗体的失活。在抗体领域，抗体与的偶联同样存在上面所说的问题（由于抗体表面可能存在很多可修饰的氨基酸，硅片表面羟基化，不能确定连在哪个部位 感受完这种粗糙度之后，2010年就有人把疏水蛋白引入到检测中，
