一、主要试剂材料
细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)（Solarbio，G0170）
DMEM（Hyclone，SH30023）
FBS（Hyclone，SH30070.03）
青链mei素（Hyclone，SV30010）
胰酶（Hyclone，SH30042.01）
PBS（南京生兴，SN331）
CO2培养箱（Thermo fisher，3131）
Confocal荧光显微镜（Zeiss，LSM710）
二、实验方案
1、MG63及其耐药株培养在含10%胎牛xue清的DMEM完全培养基中培养，培养在37℃含5%CO2的细胞培养箱中培养，当细胞增殖至80%-90%时，用胰酶将细胞消化下来，按照1:3比例传代。
2、将1×106个细胞种在3.5cm玻璃底培养皿中，将细胞放入培养箱中培养过夜后，分别加入miR-22、cisp1atin、cisp1atin和miR-22后，将细胞放入培养箱中培养12h、24h。3、将细胞从培养箱中取出，去除培养基，用300～400μl的1×Wash buffer清洗细胞1次，弃上清。4、加入适量MDC Stain，轻轻混匀。5、室温避光染色15～45min。6、用300～400μl的1×Wash buffer清洗细胞2次，弃上清。7、加入100μl的Collection buffer重悬细胞，生物外包公司有哪些，滴加于载玻片上并加盖玻片。8、荧光显微镜下观察(激发滤光片波长355nm，阻断滤光片波长512nm)，拍照。
脓毒症：
是一种严重的全身性炎zheng反应综合征，是由感ran引起的机体免yi系统过度ji活和炎zheng反应失控的疾病。免yi系统反应过于激烈，导致炎zheng反应泛滥，从而引发全身性炎zheng反应综合征。
常见脓毒症造模方法：
1.细菌感ran：通过注射细菌或其产生的细菌毒su来诱导脓毒症模型。常用的细菌包括大肠杆jun、金黄色葡萄球jun、肺yan克雷伯菌等。
2.LPS诱导：脂多糖（LPS）是细菌外膜中的主要成分，具有强烈的mian疫ji活作用。可以通过注射LPS来诱导炎zheng反应和脓毒症模型。常用的给药途径包括静脉注射、腹腔注射或气道暴露。
急性肺yan：
急性肺yan是指肺部发生急性的yan症反应，通常是由细菌、病毒或其他微生物gan染引起的。急性肺yan的主要症状包括发热、咳嗽、咳痰、胸痛和呼吸困难。急性肺yan的严重程度因人而异，有些人可以在家中服用抗sheng素或抗病毒yao物zhi疗，有些人则需要住院接受氧气zhi疗或人工呼吸器支持。急性肺yan如果不及时诊断和zhi疗，可能会导致呼吸衰竭、败xue症、心脏骤停或si亡。
实验材料
C57BL/6小鼠
LPS
方法步骤
1、小鼠禁食不禁水12h 。
2、使用戊ba比妥钠（30mg/kg）腹腔ma醉，固定于板上
3、使用10mg/ml(50ul/只)的给药剂量滴入小鼠咽喉壁，并捏住鼻子约20-30s后松开。
4、诱导后小鼠正常饲养观察。
实验案例
给药2小时后，HE染色开始出现炎细胞浸润
6小时明显炎细胞浸润并肺泡壁增厚
12小时很少见到正常形态的肺泡结构
24小时肺泡壁明显增厚
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