MDC检测方法
一、主要试剂材料
细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)（Solarbio，G0170）
DMEM（Hyclone，动物模型，SH30023）
FBS（Hyclone，SH30070.03）
青链mei素（Hyclone，SV30010）
胰酶（Hyclone，SH30042.01）
PBS（南京生兴，SN331）
CO2培养箱（Thermo fisher，3131）
Confocal荧光显微镜（Zeiss，LSM710）
二、实验方案
1、MG63及其耐药株培养在含10%胎牛xue清的DMEM完全培养基中培养，培养在37℃含5%CO2的细胞培养箱中培养，动物模型制作公司，当细胞增殖至80%-90%时，用胰酶将细胞消化下来，按照1:3比例传代。
2、将1×106个细胞种在3.5cm玻璃底培养皿中，动物模型公司哪家好，将细胞放入培养箱中培养过夜后，分别加入miR-22、cisp1atin、cisp1atin和miR-22后，将细胞放入培养箱中培养12h、24h。3、将细胞从培养箱中取出，去除培养基，用300～400μl的1×Wash buffer清洗细胞1次，弃上清。4、加入适量MDC Stain，轻轻混匀。5、室温避光染色15～45min。6、用300～400μl的1×Wash buffer清洗细胞2次，弃上清。7、加入100μl的Collection buffer重悬细胞，滴加于载玻片上并加盖玻片。8、荧光显微镜下观察(激发滤光片波长355nm，阻断滤光片波长512nm)，拍照。
简单介绍Agomir
agomir的使用需要注意以下几点： agomir的设计需要参考miRBase数据库中的微RNA序列，选择合适的靶基因和靶组织。 agomir的剂量和给yao方式需要根据实验目的和动物模型进行优化，一般建议从低剂量开始逐步增加，观察效果和副作用。 agomir的效果持续时间一般为1周以上，动物实验课题外包，甚至可达5-6周，因此需要合理安排实验时间点和取样方式。 agomir的使用需要配合相应的负对照（negative control），即没有靶基因结合位点的随机序列修饰物，以排除非特异性效应。 agomir的使用需要结合其他方法进行验证，如RT-qPCR、Western blot、免mian疫组化等，以评估微RNA和靶基因表达水平的变化。
注意事项
1. 针头大小与动物的种类有关，t 同时针头一定要磨钝。
2. 检查灌注泵的运作情况，一定排出管子的气泡和空气，防止空气栓塞。
3. 经腹腔暴腔，先清楚升主动脉外面的脂肪组织和心外膜组织。
4. 将针头经左心室插入升主动脉（颜色变白的哦），并用钳子固定。
5. 解开右心耳，同时开启灌注泵。注意，不要随便揭开心脏的其他部位，否则有时候可能会灌注成功但是绝大部分会造成灌注不成功，尤其。
6. 将 4 度的生理盐水（好已动物的发白为标准，我们实验室的大鼠约用 250ml）和多聚甲醛 (根据所取得材料而定) 依次灌入。
7. 整个过程均应将动物放在冰上，以便于更好地保存目的蛋白和酶的活性。
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