为什么用无水乙醇沉淀DNA 用无水乙醇沉淀DNA,这是实验中较常用的沉淀DNA的方法。乙醇的优点是可以任意比和水相混溶, 乙醇与核酸不会起任何化学反应,对DNA很安全,因此是理想的沉淀剂。 DNA溶液是DNA以水合状态稳定存在,当加入乙醇时,乙醇会夺去DNA周围的水分子,使DNA失水而易于聚合。一般实验中,是加2倍体积的无水乙醇与DNA相混合,其乙醇的zui终含量占67%左右。 因而也可改用95%乙醇来替代无水乙醇(因为无水乙醇的价格远远比95%乙醇昂贵)。 但是加95%的乙醇使总体积增大,而DNA在溶液中有一定程度的溶解,因而DNA损失也增大, 尤其用多次乙醇沉淀时,就会影响收得率。折中的做法是初次沉淀DNA时可用95%乙醇代替无水乙酵, 后面的沉淀步骤要使用无水乙醇。也可以用0.6倍体积的异丙1醇选择性沉淀DNA。一般在室温下放置15-30分钟即可。 【从植物材料或植物培养细胞中提取基因组DNA】① 按下表称取适量的新鲜植物材料(如选用的是冷冻干燥植物材料,则用量减半),剪成小块放入研钵中,加入液氮,待样品冷冻完全后、用力研磨至粉末状。研磨时应间断加入液氮以防止材料融化。植物材料使用量 植物花、叶片10~100 mg 植物茎60~240 mg 植物根80~240 mg 植物种子80~240 mg? ?如选取植物的根、种子等样品时,因其基因组DNA含量很低,需使用超过表格中所示的参数用量,此时请分两管进行步骤1~6的实验操作,在步骤7的操作中再将各管溶液分次加入至同一Spin Column中过滤,核酸共沉剂,使各管的基因组DNA结合到同一个Spin Column上。如从培养的植物细胞中提取基因组DNA,请离心收集2×103~1×107的培养植物细胞,加入150 μl水充分悬浮细胞后移入研钵中,加入液氮后、用力研磨至粉末状。注)样品研磨应充分,否则将会严重影响基因组DNA的收率。② 将研钵移至65℃水浴,当样品粉末刚开始融化时,向研钵中加入700 μl的Solution A和1.2 μl的RNase A1,用力碾磨30秒。③ 收集650 μl研磨好的组织匀浆移至Collection Tube中。如匀浆体积不足650 μl,请补充Solution A至650 μl。65℃保温15分钟。注)处理富含纤维的根/茎等植物材料或富含淀粉、蛋白质的种子等时,可延长水浴时间至60分钟。tRNA二级结构约50%碱基配对,形成四段双螺旋,与五段非配对序列形成三叶草形结构。该结构中存在四臂四环:①氨基酸臂。?②二氢尿C4H4N2臂(DHU臂、D臂)和二氢尿C4H4N2环(DHU环、D环),特征是含二氢尿C4H4N2(DHU、D)。?③反密码子臂和反密码子环,特征是反密码子环含反密码子。反密码子5′端与尿苷酸连接,3′端与piao呤核苷酸连接。TΨC臂(T臂)和TΨC环(Ψ环),特征是TΨC环含胸腺C4H4N2核糖核苷酸T54假尿苷酸Ψ55胞苷酸C56。④额外环3~21nt。tRNA三级结构呈L形,氨基酸结合位点位于其一端,反密码子环位于其另一端,DHU环和TΨC环虽然在二级结构中位于两侧,但在三级结构中却相邻。尽管各种tRNA的长度和序列不尽相同,但其三级结构相似,提示三级结构与其功能密切相关。 核酸共沉剂-友名生物(推荐商家)由武汉友名生物技术有限公司提供。武汉友名生物技术有限公司是从事“商务服务”的企业,公司秉承“诚信经营,用心服务”的理念,为您提供更好的产品和服务。欢迎来电咨询!联系人:董先生。 产品:友名生物供货总量:不限产品价格:议定包装规格:不限物流说明:货运及物流交货说明:按订单