棉花等酚类、多糖类物质较多的植物ＤＮＡ提取法：1 取2ｇ新鲜幼嫩的叶片放入研钵中，加入液氮后、充分研磨，待成极细的粉末状时迅速转入到50ｍｌ离心管中。2 在50ｍｌ离心管中加入10ｍｌ冰预冷的提取缓冲液，在涡悬振荡器上充分混匀。3 于4℃，2700×ｇ离心20分钟，倒去上清液。4 在沉淀中加入5ｍｌ裂解缓冲液，在涡旋振荡器上充分混匀。5 于65℃水浴锅中温育30ｍｉｎ。6 加入5ｍｌ氯1仿/异戊1醇(24/1)，并上下翻转以充分混合。7 于4℃，2700×ｇ离心5分钟。8 转移上层水相至一新的50ｍｌ离心管中。9 重复步骤7-9一次。10 加入2/3体积的冰预冷的异丙1醇，并上下翻转以充分混合，至-20℃2ｈ。11 于4℃，1200×ｇ离心10ｍｉｎ。12 在一新管中加入20ｍｌ含80%乙醇15ｍｍｏｌ/ＬＮａＡｃ溶液，用玻棒将ＤＮＡ转入该管(如不能直接用玻棒缠出，可离心后倒出上清，再在其中加入20ｍｌ含80%乙醇15ｍｍｏｌ/ＬＮａＡｃ溶液)，放置20ｍｉｎ后稍许离心，移走上清并吸出残存乙醇，室温干燥。13 加入1 0ｍｌＴＥ(10ｍｍｏｌ/ＬＴｒｉｓ-ＨＣｌＰＨ=8 0，1ｍｍｏｌ/ＬＥＤＴＡ)并加入终浓度为20(ｇ/Ｌ的ＲＮａｓｅＡ，过夜。14 风干，用50μｌＴＥ缓冲液溶解，存于-20℃备用。 DNA提取过程中各种试剂的作用及原理溶液II-NaOH-SDS液：NaOH：核酸在pH大于5，小于9的溶液中，是稳定的。但当pH>12或pH<3时，随机引物DNA标记，就会引起双链之间氢键的解离而变性。 在溶液II中的NaOH浓度为0.2mo1/L，加抽提液时，该系统的pH就高达12.6， 因而促使染色体DNA与质粒DNA的变性。 SDS： SDS是离子型表面活性剂。它主要功能有： (1)溶解细胞膜上的脂质与蛋白，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜。 (2)解聚细胞中的核蛋白。 (3)SDS能与蛋白质结合成为R-O-SO3-…R+-蛋白质的复合物，使蛋白质变性而沉淀下来。 但是SDS能抑制核糖核酸酶的作用，所以在以后的提取过程中，必须把它去除干净，防止在下一步操作中 (用RNase去除RNA时)受到干扰。提取DNA常用的方法 一.酚抽提法：先用蛋酶K、SDS破碎细胞，消化蛋白，然后用酚和酚-氯DNA大小为100-150kb 二.甲酰胺解聚法：破碎细胞同上，然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合，再透析获得DNA可得DNA200kb左右。 三.玻璃棒缠绕法：用盐酸胍裂解细胞，将裂解物铺于乙醇上，然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅，DNA沉淀液绕于玻棒。生成DNA约80kb。 四.异丙1醇沉淀法：基本同1法，仅用二倍容积异丙1醇替代乙醇，可去除小分子RNA(在异丙1醇中可溶状态) 五.表面活性剂制备法：用Triton X-100A或NP40表面活性剂破碎细胞，然后用蛋白酶K或酚去除蛋白，乙醇沉淀或透析。 六.加热法制备：加热96℃-100℃，五分钟，然后离心后取上清，可用于PCR反应。 七.碱变性制备：先用NaOH作用20分钟，再加HCI中和，离心后取上清，含少量DNA。 随机引物DNA标记-友名生物(推荐商家)由武汉友名生物技术有限公司提供。武汉友名生物技术有限公司位于湖北武汉市洪山区野芷湖西路16号创意天地办公04栋701。在市场经济的浪潮中拼博和发展，目前友名生物在其它中享有良好的声誉。友名生物取得全网商盟认证，标志着我们的服务和管理水平达到了一个新的高度。友名生物全体员工愿与各界有识之士共同发展，共创美好未来。 产品：友名生物供货总量：不限产品价格：议定包装规格：不限物流说明：货运及物流交货说明：按订单
