水中微生物DNA提取试剂盒，样本制备步骤。步骤1. 样本过滤1.1 从试剂盒中小心取出滤膜。用水样润湿滤膜。1.2 将滤膜放置在滤器中，并过滤必要体积的水样。步骤2. 菌体裂解* 提前准备：预先将恒温仪设置到70℃，将恒温箱设置到37℃。2.1将样本过滤后的滤膜翻转放置到试剂盒提供的IncubationDish（平皿）中。2.2 吸取2mllysis buffer（裂解液），并加到滤膜上。2.3 将滤膜浸泡在裂解液中，小心摇匀平皿并在37°C孵育30分钟。2.4 用平皿中的裂解液冲洗滤膜，并摇晃平皿10秒钟。2.5 将平皿中的400μl裂解液转移至IncubationTube（孵育管），70°C孵育10分钟。2.6 样本短暂离心，并加入400μl Binding Buffer（结合液），立即涡旋充分混匀，以防止DNA沉淀。请勿离心样本，并立即进行下一步。步骤3. DNA提取3.1 将步骤2.6中的混合液（~800μl）转移到CollectionTube（收集管）内的SpinColumn（离心柱）中，小心液体不要沾到离心柱的边缘。3.2 离心柱离心≥10000× g，1分钟。弃掉收集管中的液体。重新将离心柱插到原有的收集管中。3.3 离心柱中加入500μl洗液1。离心≥10000×g，1分钟。弃掉收集管中的液体。重新将离心柱插到原有的收集管中。3.4 离心柱中加入500μl洗液2。离心≥10000×g，1分钟。弃掉收集管中的液体。将离心柱插到一个新的收集管中。3.5 zui大速度离心3分钟，以去除残留的洗液2。3.6 弃掉收集管。3.7 吸取60μl已70℃预热的洗脱液，直接加到离心柱的硅胶膜上。硅胶膜表面应全部覆盖洗脱液。3.8 室温静置2分钟，然后离心8000×g，2分钟，以洗脱DNA。3.9 样本保存管中的洗脱液即包含DNA，可直接用于PCR，或储存在2~8℃，可存放1周。长期储存是在≤-18℃。 DNA提取过程中各种试剂的作用及原理 溶液I—溶菌液： 溶菌酶：它是糖苷水解酶，能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1，4糖苷键，因而具有溶菌的作用。当溶液中pH小于8时，溶菌酶作用受到抑制。 葡萄糖：增加溶液的粘度，维持渗透压，小RNA纯化，防止DNA受机械剪切力作用而降解。 EDTA： (1)螯合Mg2+、Ca2+等金属离子，抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用(DNase作用时需要一定的金属离子作辅基); (2)EDTA的存在，有利于溶菌酶的作用，因为溶菌酶的反应要求有较低的离子强度的环境。回收产物的检测1.紫外分光光度计法检测DNA在OD260处有明显吸收峰，当OD260=1时，相当于大约50 ng/μL双链DNA、40 ng/μL单链DNA。OD260/OD280≈1.6~1.9时，说明DNA纯度较高。若洗脱时不用洗脱缓冲液，而是用去离子水，会使比值偏低，因为离子的存在会影响吸光度。但不表示纯度低。2.SYBR法检测取回收产物1 μL，与1 μL SYBR染料混匀，于荧光透1视仪下观察是否有黄绿色荧光。3.琼脂糖凝胶电泳法检测取回收产物5 μL，与10×Loading Buffer混匀，DNA Marker加5 μL，电泳后凝胶成像观察。5 μL DNA Marker相当于每个条带50 ng DNA，观察目的条带亮度大致为Marker的两倍，则大致估算其浓度约为20 ng/μL。 小RNA纯化-武汉友名生物公司由武汉友名生物技术有限公司提供。武汉友名生物技术有限公司拥有很好的服务与产品，不断地受到新老用户及人士的肯定和信任。我们公司是商盟认证会员，点击页面的商盟客服图标，可以直接与我们客服人员对话，愿我们今后的合作愉快！ 产品：友名生物供货总量：不限产品价格：议定包装规格：不限物流说明：货运及物流交货说明：按订单
