DNA提取过程中各种试剂的作用及原理 溶液I—溶菌液： 溶菌酶：它是糖苷水解酶，能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1，4糖苷键，因而具有溶菌的作用。当溶液中pH小于8时，溶菌酶作用受到抑制。 葡萄糖：增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械剪切力作用而降解。 EDTA： (1)螯合Mg2+、Ca2+等金属离子，抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用(DNase作用时需要一定的金属离子作辅基); (2)EDTA的存在，有利于溶菌酶的作用，因为溶菌酶的反应要求有较低的离子强度的环境。 为什么用无水乙醇沉淀DNA 用无水乙醇沉淀DNA，这是实验中较常用的沉淀DNA的方法。乙醇的优点是可以任意比和水相混溶， 乙醇与核酸不会起任何化学反应，对DNA很安全，因此是理想的沉淀剂。 DNA溶液是DNA以水合状态稳定存在，当加入乙醇时，乙醇会夺去DNA周围的水分子，使DNA失水而易于聚合。一般实验中，是加2倍体积的无水乙醇与DNA相混合，其乙醇的zui终含量占67%左右。 因而也可改用95%乙醇来替代无水乙醇(因为无水乙醇的价格远远比95%乙醇昂贵)。 但是加95%的乙醇使总体积增大，而DNA在溶液中有一定程度的溶解，因而DNA损失也增大， 尤其用多次乙醇沉淀时，就会影响收得率。折中的做法是初次沉淀DNA时可用95%乙醇代替无水乙酵， 后面的沉淀步骤要使用无水乙醇。也可以用0.6倍体积的异丙1醇选择性沉淀DNA。一般在室温下放置15-30分钟即可。植物ＤＮＡ的ＳＤＳ提取法：1 取2-3ｇ新鲜叶片，在液氮中研磨成粉状(防止溶化)后转入15ｍｌ离心管中。2 加入5ｍｌ于65℃预热的提取缓冲液，65℃水浴保温30ｍｉｎ(摇动数次)，使提取液与样品充分混合。3 加入2ｍｌ5ｍｏｌ/ＬＫＡｃ，剧烈振荡，冰浴保温20ｍｉｎ以上。4 2700×ｇ离心20ｍｉｎ，将上清液倒入新的15ｍｌ离心管中，(若提取ＤＮＡ用于Ｓｏｕｔｈｅｒｎ等实验，一般在转移上清时加滤膜，防止样品残渣混入，可保证ＤＮＡ纯度)。5 加入4ｍｌ氯1仿/异戊1醇(24∶1)，真菌鉴定试剂盒，摇匀，平衡，2700×ｇ离心15ｍｉｎ。6 在另一新的15ｍｌ离心管中加入5ｍｌ预冷的异丙1醇，将上清液用移液枪转入此管，在-20℃冷却30ｍｉｎ以上。7 2700×ｇ离心10ｍｉｎ，弃去上清液，用4ｍｌ70%乙醇洗涤，室温保持10ｍｉｎ。2700×ｇ离心3ｍｉｎ，倒去上清液。8 重复步骤7，用4ｍｌ70%乙醇洗涤，室温保持10ｍｉｎ。2700×ｇ离心3ｍｉｎ，倒去上清液。超净工作台内吹干(3ｈ左右)。9 加1ｍｌＴＥ缓冲液中溶解，加10μｌＲＮａｓｅ(10ｍｇ/ｍｌ)，在37℃恒温箱中温育20ｍｉｎ。10 再加100μｌ3ｍｏｌ/ＬＮａＡｃ和2ｍｌ无水乙醇，2700×ｇ离心3ｍｉｎ，倒去上清液。超净工作台内吹干(3ｈ左右)。11 将ＤＮＡ沉淀溶于150μｌＴＥ中，置于超净工作台内(3ｈ左右)。将ＴＥ溶液转入已灭菌的1 5ｍｌｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管中，-20℃保存备用。 真菌鉴定试剂盒-友名生物(在线咨询)由武汉友名生物技术有限公司提供。真菌鉴定试剂盒-友名生物(在线咨询)是武汉友名生物技术有限公司今年新升级推出的，以上图片仅供参考，请您拨打本页面或图片上的联系电话，索取联系人：董先生。 产品：友名生物供货总量：不限产品价格：议定包装规格：不限物流说明：货运及物流交货说明：按订单
