PCR的创建Khorana (1971)等zui早提出核酸体外扩增的设想:“经DNA变性,与合适的引物杂交,用DNA聚合酶延伸引物,PCR酶,并不断重复该过程便可合成tRNA基因。”但由于当时基因序列分析方法尚未成熟,热稳定DNA聚合酶尚未报道以及引物合成的困难,这种想法似乎没有实际意义。加上分子克1隆技术的出现提供了一种克1隆和扩增基因的途径,所以Khorana的设想被人们遗忘了。1983年4月的一个星期五晚上,他开车去乡下别墅的路上,猛然闪现出“多聚酶链式反应”的想法。1983年12月,Mullis用同位素标记法看到了10个循环后的49 bp长度的第yi个PCR片段;1985年,Kary Mullis在Cetus公司工作期间,发明了PCR。Mullis要合成DNA引物来进行测序工作,却常为没有足够多的模板DNA而烦恼。1985年10月25日申请了PCR的专1利,1987年7月28日批准(专1利号4,683,202 ),Mullis是第yi个发明人;1985年12月20日在Science杂志上发表了第yi篇PCR的学术论1文,Mullis是共同作者;1986年5月,Mullis在冷泉港实验室做专题报告,全世界从此开始学习PCR的方法。 PCR反应特异性强:PCR反应的特异性决定因素为:①引物与模板DNA特异正确的结合;②碱基配对原则;③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;④靶基因的特异性与保守性。其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及TaqDNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。pcr扩增的基本原理基本原理:PCR技术的基本原理类似于DNA的天然copy过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。DNA的半保留复1制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链,在DNA聚合酶的参与下,根据碱基互补配对原则copy成同样的两分子拷贝。在实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,加入设计引物,DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复1制。 PCR酶-武汉友名生物(在线咨询)由武汉友名生物技术有限公司提供。武汉友名生物技术有限公司实力不俗,信誉可靠,在湖北 武汉 的其它等行业积累了大批忠诚的客户。友名生物带着精益求精的工作态度和不断的完善理念和您携手步入,共创美好未来! 产品:友名生物供货总量:不限产品价格:议定包装规格:不限物流说明:货运及物流交货说明:按订单