原位杂交是指;分子杂交的一种形式。由未经抽提分离的染色体DNA,在原来位置上被变性成单链后,与探针进行分子杂交。1977年由本顿(W.D.Benton)和戴维斯(R.W.Davis)在原分子杂交基础上发展的一种较新的分子杂交技术。方法是将菌落或噬菌斑转移到硝9酸纤维素滤膜上,使在原位发生溶菌后变性的DNA,GISH,同滤膜原位结合,再与有放5射性同位素标记的特定核苷酸“探针”杂交,其结果可用放5射自显影来显示,出现银粒的地方便是待测染色体DNA上与探针互补顺序所在的位置。对检测转化群落中的DNA序列或任何一种插入的DNA序列,以及动植物的基因定位工作,都具有广泛应用价值。(见“分子杂交”、“放5射自显影”、“影印培养技术”) 杂交技术zui重要的因素之一是选择zui适的杂交反应温度。若反应温度Tm 10~15℃,碱基顺序高度同源的互补链可形成稳定的双链,错配对减少。若反应温度再低(Tm-30℃),虽然互补链之间也可形成稳定的双链,但互补碱基配对减少,错配对增多、氢键结合的更弱。如两个同源性在50%左右或更低些的DNA,调整杂交温度可使它们之间的杂交率变化10倍,因此在实验前必须首先确定杂交温度。通常有三种温度可供试验,即zui适复性温度、苛刻复性温度及非苛刻复性温度。温度的选择及温度对杂交的影响见表18-3。zui适复性温度(Optimunm renaturation temperature, TOR):Tor =Tm –25℃苛刻复性温度:Ts = Tm – (10或15℃)非苛刻复性温度:Tns =Tm – (30或35℃)原位杂交技术基本原理原位杂交技术的基本原理是利用核酸分子单链之间有互补的碱基序列,将有放6射性或非放6射性的外源核酸(即探针)与组织、细胞或染色体上待测DNA或RNA互补配对,结合成专一的核酸杂交分子,经一定的检测手段将待测核酸在组织、细胞或染色体上的位置显示出来。为显示特定的核酸序列必须具备3个重要条件:组织、细胞或染色体的固定、具有能与特定片段互补的核苷酸序列(即探针)、有与探针结合的标记物。 GISH-思特进由武汉思特进科技发展有限公司提供。武汉思特进科技发展有限公司是湖北 武汉 ,办公、文教项目合作的见证者,多年来,公司贯彻执行科学管理、发展、诚实守信的方针,满足客户需求。在思特进领导携全体员工热情欢迎各界人士垂询洽谈,共创思特进更加美好的未来。 产品:思特进供货总量:不限产品价格:议定包装规格:不限物流说明:货运及物流交货说明:按订单