荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization， FISH）是一种分子细胞遗传学技术，是20世纪80年代末期发展起来的一种非放6射性原位杂交技术。目前这项技术已经广泛应用于动植物基因组结构研究、染色体结构变异分析、病毒感5染分析、人类产前诊断、肿5瘤遗传学和基因组进化研究等许多领域。FISH的基本原理是用荧光标记的单链核酸为探针，与待检材料中未知的单链核酸进行特异性结合，形成可被检测的杂交双链核酸。可用荧光标记的探针直接与染色体进行杂交从而对基因进行染色体定位。 根据不同的杂交实验要求，应选择不同的核酸探针。在大多数情况下，可以选择克0隆的DNA或cDNA双链探针。但是在有些情况下，必须选用其它类型的探针如寡核苷酸探针和RNA探针。例如，在检测靶序列上的单个碱基改变时应选用寡核苷酸探针，在检测单链靶序列时应选用与其互补的DNA单链探针（通过克0隆人M13噬菌体DNA获得）或RNA探针，寡核苷酸探针也可。长的双链DNA探针特异性较强，适宜检测复杂的靶核苷酸序列和病原体 ，但不适宜于组织原位杂交，因为它不易透过细胞膜进入胞内或核内。在这种情况下，寡核苷酸探针和短的PCR标记探针（80～150bp）具有较大的优越性。在条件都得到满足的情况下，杂交的成败就取决于保温时间。时间短了，杂交反应不完成；时间长了也无益，会引起非特异结合增多。一般杂交反应要进行20h左右。1966年Britten和Kohne推荐用Cot =值来计算杂交反应时间。Cot 值实际上是杂交液中单链起始浓度（Co）和 反应时间（t）的乘积。实验表明Cot =100时，杂交反应基本完成。Cot=0，基本上没有杂交。例如在液相杂交中未标记的DNA 400μg/ml（按单股DNA每微克 紫外吸收值为0.024计算，总的吸收值为 9.6），原位杂交，如果反应时间为21h，那么对于未标记的DNA来说，Cot =9.6/21 =100.8，杂交完成了。对标记DN A（浓度为0.1μg/ml）来说Cot值为0.05，这就充分排除了标记DNA的自我复性。Tm值25℃时杂交zui佳，所以首先要根据公式（4）计算杂交体Tm 值。由此式可见，通过调节盐浓度、甲酰胺浓度和杂交温度来控制所需的严格性。 原位杂交-思特进由武汉思特进科技发展有限公司提供。“动植物，细菌，细胞生物实验”选择武汉思特进科技发展有限公司，公司位于：湖北省武汉市江夏区高新四路40号葛洲坝，多年来，思特进坚持为客户提供好的服务，联系人：夏经理。欢迎广大新老客户来电，来函，亲临指导，洽谈业务。思特进期待成为您的长期合作伙伴！ 产品：思特进供货总量：不限产品价格：议定包装规格：不限物流说明：货运及物流交货说明：按订单
