杂交技术zui重要的因素之一是选择zui适的杂交反应温度。若反应温度Tm 10～15℃，碱基顺序高度同源的互补链可形成稳定的双链，错配对减少。若反应温度再低（Tm-30℃），虽然互补链之间也可形成稳定的双链，但互补碱基配对减少，原位杂交，错配对增多、氢键结合的更弱。如两个同源性在50%左右或更低些的DNA，调整杂交温度可使它们之间的杂交率变化10倍，因此在实验前必须首先确定杂交温度。通常有三种温度可供试验，即zui适复性温度、苛刻复性温度及非苛刻复性温度。温度的选择及温度对杂交的影响见表18-3。zui适复性温度（Optimunm renaturation temperature， TOR）：Tor =Tm –25℃苛刻复性温度：Ts = Tm – (10或15℃)非苛刻复性温度：Tns =Tm – (30或35℃) 杂交液中的阳离子浓度通过静电排斥作用影响了杂交体之间的链稳定性，较高的盐浓度将增加杂交体的稳定性。大于0.4M的Na离子浓度，对Tm值、双链复性速率的影响不大，但随着Na离子浓度的降低，将显著影响Tm值和双链复性速率。有2机溶2剂（甲酰胺）的作用是降低DNA-DNA和DNA-RNA等双链体的解链温度。通常DNA需要在0.1~0.2M Na+ 90~100℃的条件下变性，那么应用于原位杂交，样品必须在65~75℃的条件下进行长时间变性，这将导致样品形态学的破坏。50%甲酰胺的应用能将杂交温度降至30~45℃。硫酸葡聚糖具有很强的水合性，高浓度的硫酸葡聚糖会使得核酸分子无法获得周边亲水环境，增加了探针浓度，加快杂交反应速率。原位杂交技术基本原理原位杂交技术的基本原理是利用核酸分子单链之间有互补的碱基序列，将有放6射性或非放6射性的外源核酸(即探针)与组织、细胞或染色体上待测DNA或RNA互补配对，结合成专一的核酸杂交分子，经一定的检测手段将待测核酸在组织、细胞或染色体上的位置显示出来。为显示特定的核酸序列必须具备3个重要条件：组织、细胞或染色体的固定、具有能与特定片段互补的核苷酸序列(即探针)、有与探针结合的标记物。 原位杂交-思特进(推荐商家)由武汉思特进科技发展有限公司提供。武汉思特进科技发展有限公司是湖北 武汉 ,办公、文教项目合作的见证者，多年来，公司贯彻执行科学管理、发展、诚实守信的方针，满足客户需求。在思特进领导携全体员工热情欢迎各界人士垂询洽谈，共创思特进更加美好的未来。 产品：思特进供货总量：不限产品价格：议定包装规格：不限物流说明：货运及物流交货说明：按订单
