试剂与仪器试 剂: pET28a-mrj 转 Rosetta 菌 0种 由 本 实 验 室 所保存。免0疫佐剂 quickantibody 购自北京康碧泉公司;HAT 选择性培养基、HT 培养基、8-Azaguanine 和融合试剂 50% PEG 购自美国 Sigma 公司; 胎牛血0清及 PRMI 1640 培 养 基 为 Hyclone 产 品; 辣 根 过 氧 化 物 酶( HRP) 标记山羊抗小鼠 IgG ; 8 周龄雌性健康 BALB / c 小鼠，本实验室饲养; 小鼠骨0髓瘤细胞 SP2 /0 由南京大学赠送，融合前两星期复苏并经 8-Azaguanine筛选; 其他试剂均为国产分析分析纯。仪器: 二 氧 化 碳 培 养 箱( Thermo) ; 倒 置 显 微 镜( Olympus) ; 细胞培养耗材，96 孔板、24 孔板、6 孔细胞培养板、移液qiang( Corning) ; 1 mL 的 A 蛋白层析柱 材料与方法一、材料AFP购自上海领潮公司。SP2／0骨0髓瘤细胞(中科院上海细胞库)。8～12周龄Balb／c小鼠(第四军0医大学实验动物中心)。SPF级。二、方法1．动物免0疫：将4只8～12周龄Balb／c小鼠随机分为两组，每组2只，分别命名为1号和2号(第yi组)、3号和4号(第二组)。第yi组按常规免0疫方法进行免0疫一…，第二组采用改良的免0疫方法进行免0疫。免0疫前静脉采集少量血液，析出血0清作为后续检测的阴性对照血0清。第yi组：AFP50ug(50肚1)与等量福氏完全佐剂(Sigma，美国)混合，充分乳化后注入8～12周龄Balb／c小鼠腹腔，多抗制备佐剂，2周后用同量抗原加不完全福氏佐剂(Sigma，美国)腹腔注射，4周后用同量抗原加不完全福氏佐剂腹腔注射，融合前3 d作腹腔注射加强免0疫。饲养层细胞制备于细胞融合天，准备饲养层细胞，常选用小鼠腹腔渗出细胞，其中主要是巨噬细胞和淋巴细胞。应用腹腔渗出细胞的好处是: 一方面做饲养细胞，另一方面巨噬细胞可以吞噬死0亡的细胞和细胞碎片，为融合细胞的生长造成良好的环境。腹腔细胞的数目应适宜，过少则不能提供杂交瘤细胞所需要的生长因子，过多会阻碍杂交瘤细胞的贴壁，一般以铺满孔底 30% 为好。 多抗制备佐剂-博特龙(在线咨询)由苏州博特龙技术有限公司提供。苏州博特龙技术有限公司是从事“二抗,HRP,Biotin,FITC,AU,PE”的企业，公司秉承“诚信经营，用心服务”的理念，为您提供更好的产品和服务。欢迎来电咨询！联系人：刘总。 产品：博特龙供货总量：不限产品价格：议定包装规格：不限物流说明：货运及物流交货说明：按订单
