4.3.2 洗板加标本和酶标抗0体后需要洗涤，通过洗涤可以去掉未反应试剂帮助降低本底。满意的洗涤方法是孔与孔之见均匀一致并且没有液体的相互污染。洗涤时将板子翻转并将液体甩掉拍净。洗涤液中含有 0.1%吐温-20 以抑制非特异性结合。如果实验过程中断，应该将酶标板中加入洗涤液以避免酶标板干燥。4.3.3 HRP 标记抗0体HRP 标记的抗0体作为检测抗0体，与底物反应后，使底物显色。实验过程中避免接触叠氮钠，叠氮钠可使 HRP 失活。4.3.4 底物使用 TMB 底物，一般来说，产生的颜色与待测物浓度呈正比。 检测条件概述4.3.1 包被酶标板多种包被条件：抗原或抗0体浓度、pH、离子强度、温度和孵育时间都影响包被效率。 此外，结合蛋白的数量与分子量成反比。试剂盒中包被液为优化的磷酸盐缓冲液，适用于大多数抗原和抗0体的包被。微孔板应选择专0用于 ELISA 的酶标板，不建议使用组织培养板。包被时，抗原或抗0体在包被缓冲液中稀释后加入到酶标板中室温孵育，尽可能使用zui纯的抗原或抗0体。一般来说 1～10μg/ml 室温 1 小时能够包被饱和。为方便，2～8℃过夜可以到满 意的包被效果。 包被后，酶标板用 BSA 稀释/封闭液封闭 45 分钟，稀释/封闭液中含3%BSA，能够通过封闭未反应部位减少非特异性结合并保护包被上的蛋白质活性。如果暂时不继续实验，可以 用塑料膜覆盖酶标板后冷藏保存，需要时再恢复室温继续实验。棋盘滴定确定试剂的zui佳浓度1.加 100μl 稀释液到 2～12 列的每孔。2.加 200μl 稀释的试剂到第yi列的每孔中。3.从第01 列的孔中取 100μl 转移到第二孔中，混匀用qiang吹吸 3～5 次。4. 重复步骤 3 向后稀释，一直到第011 列，HRP标记抗小鼠，吸取第011 列 100μl 弃去， 第012 列作为对照。 重复以上的操作，从 A 排至 G 排， 稀释第二个试剂，H 排作为对照。7.操作步骤7.1 杂交瘤筛选包被液：在 1×包被液中稀释抗原至合适的浓度（一般 1～10μg/ml）。一抗工作液：含有单克0隆抗0体的培养液。二抗工作液：取 25μl 的酶标二抗稀释到 5.0 ml 1X BSA 的稀释/封闭液中或更大稀释比例。 HRP标记抗小鼠-苏州博特龙由苏州博特龙技术有限公司提供。苏州博特龙技术有限公司位于江苏省苏州市相城开发区观塘路1号西交大漕湖科技园C幢810。在市场经济的浪潮中拼博和发展，目前博特龙在生物制品中享有良好的声誉。博特龙取得全网商盟认证，标志着我们的服务和管理水平达到了一个新的高度。博特龙全体员工愿与各界有识之士共同发展，共创美好未来。 产品：博特龙供货总量：不限产品价格：议定包装规格：不限物流说明：货运及物流交货说明：按订单
