细胞增殖检测
本公司应用MTT比色法, 检测细胞存活和生长。其检测原理为huo细胞内线粒体中的琥珀酸脱氢酶能催化外源性无色的MTT形成蓝色的结晶Formazan,并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二jia基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的Formazan,用酶联mian疫检测仪在一定波长处测定其光吸收值,可间接反映huo细胞数量。在一定细胞数范围内,流式细胞检测,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿liu药wu筛选、细胞毒性试验、以及肿liu放she敏感性测定等。服务内容 1. 细胞接种:收到客户细胞后,我们会用细胞计数板计数细胞,得出细胞悬液浓度。计算出应稀释的倍数,按MTT试剂盒要求在96孔板内接种 相应浓度的细胞悬液;
2. 细胞培养:然后在无菌恒温细胞培养箱内培养接种好的96孔细胞培养板,并实时观察细胞状态;
3. yao物处理并呈色:按不同浓度梯度加入yao物作用细胞;
4. 溶解,比色:加入MTT检测试剂,按操作要求孵育相应时间,在mei标仪内检测对照组和实验组的吸光值。并处理数据得出比色结果。
关于细胞培养的常见问题:
Q: 细胞在培养过程中出现碎片如何处理?
A: 贴壁细胞在移除原培养液后,用 PBS 冲洗 2-3 遍;悬浮细胞离心移除原培养液后,加入 PBS 重悬,离心移除 PBS; 一般建议重复上述步骤 2-3 遍,用 800-1000rpm 离心 3-5 分钟。
Q:细胞冻存能放在 -80℃ 保存吗?
A:长期保存的细胞应当放在液氮(-196℃)中保存,细胞生物学,短时间(一般 1 周-2 周)可以存放在 -80℃。
Q:培养瓶是用密封盖好,还是用透气盖好?
A:都可以。只是在使用密封盖培养瓶时,瓶盖旋至约 2/3,湖南细胞,不要完全拧紧,预留约 1/3 以便细胞可以透气;有些的密封盖培养瓶的瓶盖上有适合位置指示标志。
Q:何谓 FBS,FCS,CS,癌细胞,HS
A: Fetal bovine serum(FBS)和 Fetal Calf Serum(FCS)之间没有区别,都是指胎牛;FCS 不是正规命名,尽量不使用。Calf Serum(CS)则是指小牛。Horse Serum(HS)则是指马。
细胞培养中常见的污染及解决方法
支原体污染
支原体是隐蔽的污染物,不能通过过滤去除。显微镜下没有任何可见的支原体污染迹象,比如细胞病变和浊度或 pH 值变化(即使在严重污染的培养基中),这样就会导致我们产生错误的安全感。而在牛中,支原体是常见的微生物之一。
解决方法:通常的过滤灭菌方法对支原体没有影响。细胞一旦被支原体污染,特别是对重要的细胞系,必须去除支原体,一般的方法有、抗和抗与补体联合。值得注意的是,支原体很突出的结构特征是没有细胞壁。因此,它对作用于细胞壁的生物合成(如 β-内酰胺类、万古等)完全不敏感,并且通常对多粘菌素、利福平和类具有耐药性。相反,四环素类和大环内酯类对支原体的抑制作用很强,而氨基糖苷类和氯的抑制作用较弱。
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