2.2旋转圆筒睡眠剥夺法
此方法于 1979 年先应用于睡眠剥夺实验中,设备主要由一柱形圆筒及一小型慢速马达构成。圆筒直径 30 cm,生物外包公司推荐,高 30 cm 。圆筒底由 PVC (聚)构成,侧壁由直径为 10.4 m m 的 PVC 杆围成。杆长度 30 cm,杆之间间隔 15.5 m m,圆筒与小型马达相连。马达转速为每 45 s转 1 圈(也有学者应用每 m in 转 1 圈)。至少在实验前 2 d每天将大鼠放入圆筒中适应环境 1 次,适应时间不少于 3 h。实验时将马达按 45 s每1 圈进行匀速转动,通过圆筒的转动带动大鼠不停运动而达到睡眠剥夺的目的。此类方法简单易行,睡眠剥夺效果明显。缺点是长时间不停运动可引起机体的运动后应激反应及身体疲劳,可能干扰睡眠剥夺实验结果! 此类方法发展出多种变化,有实验者在进行新生大鼠睡眠剥夺时将筒旋转速调节至 2~3 r/m in后期逐渐增加至 6~7 r/m in。
高架十字迷宫行为学检测:
实验原理
高架十字迷宫(the elevated plus maze,EPM)是评价啮齿类动物焦躁反应的实验方法 , 相较伤害性刺激所致小鼠焦躁行为检测(如电刺激 、 噪声刺激 、 饮食剥夺和暴露在捕食者气味等), 该实验具有操作简单的优点 , 能直观反映小鼠的条件应答 。 EPM实验是在高架Y型迷宫的基础上发展而来的 。 EPM由开臂(open arms和闭臂(closed arms)各两条组成 , 呈十字形交叉 , 交义部分为区 , 距地面有一定高度 。其原理是由于面对新事物开臂 小鼠会产生好奇心去探究 , 而它们有嗜暗的天性(闭臂), 两者之间发生探究与回避的冲突行为,产生焦躁心理。整个迷宫距离地面的高度相当于人类站在悬崖边,易导致动物产生恐惧不安的心理。可以通过对比小鼠在开臂和闭臂内的滞留时间和路程来评价小鼠的焦躁行为。
EPM实验在药品开发和研究中得到广泛的应用:主要用于苯二氮卓类药品的抗焦躁作用研究 及筛选具有抗焦l虑作用的新药,也被用于研究精神性药品滥用的影响及激s素的功能,应激对生殖、衰老、妊s娠的影响等。抗焦l虑药主要选择性地抑制边缘系统 的海马、杏仁核 ,产生抗焦躁作用。

agomir是一种用于微RNA功能研究的化学修饰的双链微RNA模拟物,它可以模仿内源性的成熟微RNA,与靶基因mRNA结合,从而调节其表达。agomir与普通的微RNA模拟物相比,具有更高的稳定性和活性,更易通过细胞膜和组织间隙,富集于ba细胞。因此,agomir可以用于体内实验,通过注射、吸入或喂食等方式给予动物,观察微RNA对生理和病理过程的影响。

agomir的合成需要对微RNA模拟物进行特殊的化学修饰,包括在反义链上加入2个liu代磷suan酯键(phosphorothioate)在5′端,4个liu代磷suan酯键在3′端,以及3′端加入胆固醇(cholesterol)基团,同时对全长核苷酸进行2′-甲yang基(2′-methoxy)修饰。这些修饰可以提高agomir的稳定性,防止被核酸酶降解,增强其与细胞膜的亲和力,促进其进入细胞。
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