植物组织原位杂交是一种重要的分子生物学技术,它可以用来研究植物基因的表达和调控。该技术利用DNA探针与目标组织中的RNA或DNA结合,从而确定目标基因的表达模式和位置。本文将介绍植物组织原位杂交的原理、步骤和应用。
原理
植物组织原位杂交的原理是利用DNA探针与目标组织中的RNA或DNA结合,原位杂交检测,从而确定目标基因的表达模式和位置。DNA探针是一段已知序列的DNA分子,可以与目标RNA或DNA的互补序列结合。在组织原位杂交中,原位杂交,DNA探针通常标记有荧光染料或性同位素,以便于检测。
组织原位杂交(Tissue in situ hybridization),植物组织原位杂交,即原位杂交组织化学技术和原位杂交细胞化学技术
原位杂交技术的基本原理
利用核酸分子单链之间有互补的碱基顺序,通过碱基对之间非共价键的形成,出现稳定的双链区,形成杂交的双链。
1.两条核苷酸单链片段,在适宜的条件下,通过氢键结合,形成DNA-DNA、DNA一RNA或RNA一RNA双键分子
2.应用带有标记的(有性同位素,如3H、35S、32P,荧光素、生物素、等非性物质)DNA或RNA片段作为核酸探针,与组织切片或细胞内待测核酸(RNA或DNA)片段进行杂交
3.用自显影等方法予以显示,在光镜或电镜下观察目的mRNA或DNA的存在与定位
用原位杂交术,可在原位研究细胞合成某种多肽或蛋白质的基因表达。
此方法有很高的敏感性和特异性,可进一步从分子水来探讨细胞的功能表达及其调节机制。已成为当今细胞生物学、分子生物学研究的重要手段。
杂交 (1) 盛有2×SSC的塑料盘同,将干烤的滤膜飘浮在液面上,浸湿5分钟。(2) 将滤膜转到200ml预洗液的玻璃皿中。滤膜何叠在一起,放于溶液中。用保鲜膜盖住玻璃皿,原位杂交公司,放到位于培养箱内的旋转平台上。于50℃处理30分钟。在这一步及以后的所有步骤中,应缓缓摇动滤膜,防止它们粘在一起。(3) 用泡过预洗液的吸水棉纸轻轻地从膜表面拭去细菌碎片,以降低杂交背景而不影响阳性杂交信号的强度和清晰度。(4) 将滤膜转到盛有150ml预杂交液的玻璃中,在适宜温度(即在水溶液中杂交时用68℃,而在50%甲酰胺中杂交时用42℃)下,预杂交1-2小时。
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