ROS是什么？
ROS也就是活性氧（reactive oxygen species，ROS）指来源于氧的自由基和非自由基。ROS在细胞生命，应激和si亡中具介导作用，动物模型构建公司，并且不同浓度的ROS在其中起着截然不同的作用，从而导致细胞命运的不同。因此对ROS的浓度或相对水平进行可靠的测量非常有必要。
实验仪器和材料
细胞培养基
胎牛xue清
青mei素/链mei素
胰酶
PBS
DMSO
活性氧（ROS）试剂盒
血球计数板
CO2培养箱
倒置荧光显微镜
实验步骤1、细胞传代培养：当细胞长至80-90%时，去除培养基，加入PBS洗1-2次，去除PBS后，加入1ml胰酶消化1-3min后，加入3ml完全培养基中和胰酶终止消化，将消化的细胞转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min。倒掉上清后，加入3ml培养基重悬细胞，四川动物模型，1:3传代至培养皿中培养。
2、将长到培养皿80%-90%的内皮细胞用胰酶消化下来，1000rpm离心，去除上清，加入完全培养基重悬细胞，将细胞分别种在6孔板中，每孔种1×106个细胞。3、待细胞贴壁后，使用不同的含药xue清的培养基培养细胞。3、待细胞贴壁后，使用不同的含药xue清的培养基培养细胞。4、48h后，动物行为学，加入DCFH-DA于培养基中，稀释倍数为1:1000。5、孵育1h后，直接将细胞置于荧光显微镜下拍照。
实验结果
简单介绍Agomir
agomir的使用需要注意以下几点： agomir的设计需要参考miRBase数据库中的微RNA序列，选择合适的靶基因和靶组织。 agomir的剂量和给yao方式需要根据实验目的和动物模型进行优化，一般建议从低剂量开始逐步增加，观察效果和副作用。 agomir的效果持续时间一般为1周以上，甚至可达5-6周，动物实验室，因此需要合理安排实验时间点和取样方式。 agomir的使用需要配合相应的负对照（negative control），即没有靶基因结合位点的随机序列修饰物，以排除非特异性效应。 agomir的使用需要结合其他方法进行验证，如RT-qPCR、Western blot、免mian疫组化等，以评估微RNA和靶基因表达水平的变化。
敲低效果验证方法：
RT-PCR
检测mRNA，是否仍存在靶 mRNA？或是否敲低成功？
这种方法非常灵敏，但无法准确预测蛋白质水平。
蛋白质印迹实验
使用抗ti来检测样品中的靶蛋白表达以及多种相关蛋白质表达，从而观察靶蛋白敲除对其它蛋白质的影响。
免yi细胞化学法
可检测是否存在敲低蛋白。
其优势在于利用双重染色法，可同时检查敲除对其它蛋白质表达的影响以及其它蛋白质在细胞中的位置。
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