预杂交
1)每个管中置换成大约300ulHYB-溶液,GISH,60℃水浴5分钟,避免振荡。
2)用等体积的HYB+取代HYB-。
3)60℃水浴,预杂交4小时以上。
杂交
1)吸去预杂交的HYB+,加上100ul已加入探针的HYB+溶液(探针浓度约为1ng/ul)..
2)60℃ 温浴过夜。
注:杂交与预杂交的温度可以是55到60度不等,温度越低,探针结合越好,温度越高,背景越小。

在原位杂交过程中,需要使用标记的核酸探针,通常是在性核素或非性物质中标记的。这些探针可以通过不同的方式制备,例如从已知序列的DNA或RNA制备,或者通过使用生物信息学方法设计和合成新的探针。
在进行原位杂交时,细胞或组织需要固定在适当的支持物上,例如载玻片。然后,探针与细胞或组织中的DNA或RNA进行杂交,通常是在加热条件下进行的。接下来,通过洗涤和显影步骤去除未结合的探针和信号增强剂,后用显微镜观察杂交信号的位置。

原位杂交技术的原理是什么?有何用途
原位杂交技术的原理是利用核酸分子单链之间有互补的碱基序列,将有性或非性的外源核酸(即探针)与组织、细胞或染色体上待测DNA或RNA互补配对,结合成专一的核酸杂交分子,经一定的检测手段将待测核酸在组织、细胞或染色体上的位置显示出来。为显示特定的核酸序列要具备3个重要条件:组织、细胞或染色体的固定、具有能与特定片段互补的核苷酸序列(即探针)、有与探针结合的标记物(曾呈奎等2000)。
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