菌落的裂解及DNA结合于纤维素滤膜
（1） 在一张保鲜膜上制作一个装有0.5mol/L NaOH的小洼（0.75ml），使菌落面朝上，将滤膜放到小洼上，展平保鲜膜，使滤膜均匀湿润，让滤膜留于原处2-3分钟。
（2） 用干纸巾从滤膜的下方吸干滤膜，植物组织原位杂交，用一张新的保鲜膜和新配制的0.5mol/L NaOH重复步骤（1）。
（3） 吸干滤膜，将滤膜转移到新的带有1mol/L Tris·Cl(pH7.4）的保鲜膜洼上。5分钟后吸干滤膜，再重复一次该步骤。
（4） 吸干滤膜，把它转移到有1.5mol/L NaCl、0.5mol/L Tris·Cl (pH7.4）的保鲜膜小洼上5分钟后吸干滤膜，转移到一张干的滤纸上，置于室温20-30分钟，使滤膜干燥。
（5） 将滤膜夹在两张干的滤纸之间，在真空烤箱中于80℃干烤2小时，固定DNA。
（6） 将固定在膜上的DNA与32 P标记的RNA进行杂交。
原位杂交第三天
1） 用1ml含10％热灭清的MABT溶液置换溶液，原位杂交，放置摇床上25分钟，然后用1mlMABT置换，25分钟，原位杂交公司，再用1mlMABT溶液置换，一小时以上，原位杂交技术，后用1mlMABT溶液置换，25分钟。
2） 用1ml 1mM左旋米睉的Staining buffer洗三次，每次放置五分钟。
3）将胚胎转入十六孔板中，吸去staining buffer，加上300ul BM Purple AP Substrate(底物，用之前加5mM左旋米唑)，十六孔板外面包上锡箔纸以避光，避免摇动，室温下显色。
4）每隔一小时观察胚胎是否开始显色
5）将显色完全的胚胎中的底物吸出，用PBST洗两三次后加上4％多聚甲醛固定，拍照。
6）4C冰箱保存。
原位杂交的基本原理是利用标记的核酸探针与细胞或组织中的DNA或RNA进行杂交，然后通过检测标记来识别探针的位置。这使得研究人员能够在细胞或组织中确定特定基因或基因组区域的位置和表达水平。
原位杂交可以用于多种类型的实验。例如，它可以用来检测特定基因在发育过程中的表达模式，或者确定特定基因变异在细胞中的分布。此外，原位杂交还可以用于诊断疾病，例如某些类型的，以及监测效果。
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