选择实验外包公司需要注意哪些事项?
报价
报价单一定要有明细。规范的外包公司会根据实验方案里的各项内容进行核算报价,材料是多少、人工检测是多少,可以看到每一笔钱花在哪里,避免笼统的报价。另外注意不要一味地追求,做过实验的都知道实验成本,外包还需要考虑人工成本。如果价格过低,实验数据就难以保证可靠和来源了。当然报价也不能虚高,做好是能在有限的经费中尽量保证课题完整性。可以要求公司根据预算来调整优化方案,尽可能节约成本。
细胞实验介绍——慢病毒建立稳转细胞系
慢病毒包装:公司使用3质粒慢病毒包装系统,慢病毒系统使用pLKO.1-EGFP、psPAX2、pMD2.G,过表达慢病毒系统使用pLVX-AcGFP、psPAX2、pMD2.G三质粒系统,将质粒混匀后使用磷酸钙转染方法转染至HEK293T细胞中,细胞系,培养48h后,收集上清。使用genecopo公司慢病毒颗粒纯化试剂盒将慢病毒纯化。纯化后留取部分检测病毒滴度,其余病毒冻存于-80℃冰箱中。
滴度检测:将病毒颗粒使用梯度稀释,分别293T细胞,72h后,在荧光显微镜下观察细胞荧光表达情况。根据细胞荧光量计算病毒滴度。
细胞:在病毒天对细胞进行计数,接种约10000个细胞于12孔板中,培养过夜后使用无培养基稀释病毒,加入12孔板中对细胞进行,病毒数量根据推荐细胞的MOI加入(若无推荐MOI,需做病毒梯度:1,5,10,50,100 5个梯度对细胞),6h后去除含病毒溶液,湖北细胞,加入完全培养基细胞培养,培养48h后,在荧光显微镜下观察细胞荧光强度。同时加入puromycin对细胞筛选,细胞增殖实验,筛选约2周时间。细胞筛选好后,使用定量PCR和Western blot检测目的基因的稳定表达情况。
实验流程:慢病毒质粒构建-HEK293T细胞培养-质粒转染293T细胞-病毒收集-病毒纯化-病毒滴度检测-细胞-稳转细胞筛选-稳转细胞鉴定
结果示例:
图 A 病毒滴度检测;B 目的细胞病毒效果图
选择实验外包公司需要注意哪些事项?
1. 实地考察
可以到公司实地考察一下实验室,看一下实验室环境、设备仪器情况,是否能满足实验方案所需条件。能整体承接课题,动物细胞。一些大型仪器公司不一定有,看有没有高校平台资源渠道共享。确保是真实进行实验的,这样后续实验结果数据也比较可靠。
2. 方案评估
实验合作前期一般会进行所需实验内容的评估,转染,来确定终实际实验方案和报价。方案评估可以看出外包团队的性。一个可靠的外包公司会对方案提出针对性的建议,评估各项实验是否能做,以及根据预算情况和实际操作对细节适当地调整。任何实验都是有不确定性的,但是前期敲定好方案能为后续实际开展实验打下良好基础,也会省去许多隐患和麻烦。
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