ELISA 是一种结合抗原、抗ti特异性反应和酶对底物高xiao催化作用的高敏感性免yi学实验技术。ELISA 的基础是抗原或抗ti的固相化及抗原或抗ti的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗ti仍保持其免yi学活性,酶标记的抗原或抗ti既保留其免yi学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗ti或抗原)与固相载体表面的抗原或抗ti起反应,fish检测,洗涤使固相载体上形成的抗原抗ti复合物与液体中的其他物质分开,实时荧光定量pcr,再加入酶标记的抗原或抗ti,通过反应使其结合在固相载体上。此时固相上的酶含量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物,咸阳pcr,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。
常规碱基分子量:
11.如何溶解引物?
答:干燥后的引物质地非常疏松,开盖前好离心一下,或管垂直向上在桌面上敲敲,将引物粉末收集到管底。根据计算出的体积加入去离子无菌水或10mM Tris pH7.5缓冲液,室温放置几分钟,振荡助溶,荧光定量pcr,离心将溶液收集到管底。溶解引物用的水一般不要用蒸馏水,因为有些蒸馏水的pH值比较低(pH4-5),引物在这种条件下不稳定。
12.如何保存引物?
答:引物合成后,经过一系列处理和纯化步骤,旋转干燥而成片状物质。引物在溶解前,室温状态下可以长期保存。溶解后的引物-20度可以长期保存。如果对实验的重复性要求较高,合成的OD数较大,建议分装,避免反复冻融。修饰荧光引物需要避光保存。
RNA pull down 检测
RNA pull down:RNA沉淀检测,是检测RNA结合蛋白与其靶RNA之间相互作用的主要实验方法之一。使用体外转录将RNA进行生物素标记,并与细胞蛋白裂解液孵育,形成RNA-蛋白复合物。复合物通过磁珠结合后分离,复合物纯化洗脱后通过Western blot验证检测特性的蛋白。若筛选可能结合的蛋白通过质谱实验进行检测筛选。

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