PCR实验室的相关设置
要完成一组PCR实验,通常需要经过试剂配制、样品处理、核酸扩增和产物分析4个实验过程。
这4个实验过程的实验用房应相邻布置,组成一个独立的PCR实验区。标准的PCR实验区包括:试剂准备区、标本制备区、扩增区、产物分析区、各区配套的缓冲区及公共走廊。
PCR实验室整体平面布局某医院PCR实验室平面布局如图1所示,整个区域有一个
pcr实验室净化施工
PCR实验室的相关设置
要完成一组PCR实验,通常需要经过试剂配制、样品处理、核酸扩增和产物分析4个实验过程。
这4个实验过程的实验用房应相邻布置,组成一个独立的PCR实验区。标准的PCR实验区包括:试剂准备区、标本制备区、扩增区、产物分析区、各区配套的缓冲区及公共走廊。
PCR实验室整体平面布局某医院PCR实验室平面布局如图1所示,整个区域有一个公用走廊,每个独立实验区设有专门的缓冲区。通过压差控制,使整个PCR实验过程中试剂和标本免受气溶胶的污染,并且降低扩增产物对人员和环境的污染。
试剂准备区该实验区主要进行的操作为贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。
试剂和用于标本制作的材料应直接运送至该区,不得经过其他区域。试剂原材料必须贮存在本区内,并在本区内制备成所需的贮存试剂。
试剂准备区配备有2~8°C冰箱和-80°C冰箱,计算冷负荷时,需要将它们计算在内。
房间的面积宜控制在15m2~20m2。本区的压力梯度要求为:相对正压状态,以防止外界含核酸气溶胶的空气进入,造成污染。
标本制备区该区域主要进行的操作为临床标本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定RNA时cDNA的合成。
标本制备区配备有2~8°C冰箱和-20°C冰箱,计算冷负荷时,需要将它们计算在内。在标本制备区,还需要配备生物安全柜,用于进行提取核酸的操作。
01
一更〔换鞋〕→二更〔清洁〕→缓冲〔清洁〕→内准备(半污染)→缓冲 〔污染〕→主实验室〔污染〕
02物流
外准备〔清洁〕→灭菌→内准备〔半污染〕→主实验室〔污染〕 按“三区一通道”形式布置,优点是可以减少污染源扩散空间,缺点是人,物双向进出,会造成交叉污染。因此应根据实验对象的要求,科学布置平面。根据工艺流程我们将P3实验室划分为污染区、半污染区、清洁区。各区之间设置缓冲间给予隔离,确保各区安全,可靠。
03压力梯度
理的压力梯度是关系到P3实验室的正常运转和工况稳定以及实验人员的舒适性,负压越大,对围护结构气密性要求越高,初投资和运行费用增加,反之负压越小,对实验室安全带来隐患.因此整个P3实验室压力梯度需要综合平衡,每级级差负压值取-10~―15Pa为宜.
当前,随着企业对净化工程的需求越来越高。为了满足大家的需求,净化工程施工单位加大了PCR实验室净化建设力度。而在PCR实验室净化建设过程中,易于受到不同因素的影响,进而影响到PCR实验室净化的质量和效益。
一、质量管理问题
(1)构建完善的PCR实验室净化管理制度。在PCR实验室净化施工过程中,时常存在许多的质量通病及突发情况,一旦出现问题,各个参与单位相互推诿的责任,包括施工单位、建设单位、监理单位等,这是由于他们未能确定好各自在项目中的职责范围,且在施工合同中,未能对各自的义务进行约束,导致整个工程管理工作出现松散现状,从而导致工程质量和及安全问题的发生,且由于不能及时采取处理措施,工程质量问题得不到及时解决,进而影响到整个工程进度。
(3)施工技术存在的问题。在PCR实验室净化施工前,为了确保施工质量,首先要对施工材料进行试验,例如在钢筋混凝土试验时,应做好钢筋抗压和抗弯试验,以保证钢筋的质量。在混凝土工程施工前,要对混凝土材料(如水泥、骨料)进行试验检测,在混凝土搅拌时,要加强计量控制。对于PCR实验室净化施工中存在的不良地基,要按照相关规范进行注浆和水灰比试验。而在实际施工过程中,部分施工企业未能按照以上要求进行施工。

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