如何避免细胞抱团?1,用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞。2,对于贴壁非常牢固的细胞(如MDCK),为了细胞更好的状态,更漂亮的样子,建议分多批多次消化,这样才能大限度地将胰酶对细胞的损伤降到低,保证细胞的状态能够优。3,消化过程中不要使劲摇动培养瓶,这样细胞特别容易成屑样脱落。细胞一旦脱落入悬液里就很难再将他吹打成单个(因为细胞没有受力点了,所以细胞很难分散开)。所以必须要在细胞未脱
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如何避免细胞抱团?1,用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞。2,对于贴壁非常牢固的细胞(如MDCK),为了细胞更好的状态,更漂亮的样子,建议分多批多次消化,这样才能大限度地将胰酶对细胞的损伤降到低,保证细胞的状态能够优。3,消化过程中不要使劲摇动培养瓶,这样细胞特别容易成屑样脱落。细胞一旦脱落入悬液里就很难再将他吹打成单个(因为细胞没有受力点了,所以细胞很难分散开)。所以必须要在细胞未脱落之前将其吹打开,严格控制好消化程度。
多肽的稳定性研究,引起多肽不稳定的原因:(1)脱酰胺反应 :在脱酰反应中,Asn/Gln 残基水解形成Asp/Glu。非酶催化的脱酰胺反应的进行。在Asn-Gly-结构中的酰胺基团更易水解,位于分子表面的酰胺基团也比分子内部的酰胺基团易水解。(2)氧化:多肽溶液易氧化的主要原因有两种,一是溶液中有过氧化物的污染,二是多肽的自发氧化。在所有的氨基酸残基中,Met、Cys和His、Trp、Tyr等易氧化。氧分压、温度和缓冲溶液对氧化也都有影响。
多肽的稳定性研究,引起多肽不稳定的原因:(1)水解:多肽中的肽键易水解断裂。由Asp参与形成的肽键比其它肽键更易断裂,尤其是Asp-Pro和Asp-Gly 肽键。(2)形成错误的二硫键:二硫键之间或二硫键与巯基之间发生交换可形成错误的二硫键,导致三级结构改变和活性丧失。(3)消旋: 除Gly外,所有氨基酸残基的α碳原子都是手性的,易在碱催化下发生消旋反应。其中Asp残基易发生消旋反应。
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