武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年,是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司;公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台;用于原位杂交的探针可以是单链或双链DNA,也可以是RNA探针。可以开展各类动、植物、细菌、细胞等生物实验。
FISH是原位杂交技术大
原位杂交
武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年,是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司;公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台;用于原位杂交的探针可以是单链或双链DNA,也可以是RNA探针。可以开展各类动、植物、细菌、细胞等生物实验。
FISH是原位杂交技术大家族中的一员,因其所用探针被荧光物质标记(间接或直接)而得名,该方法在80年代末 被发明,现已从实验室逐步进入临床诊断领域。
武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年,是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司;公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台;结果被检1128例羊水间期细胞FISH检测均成功,其中检出正常核型1081例,数目异常核型20例,与常规细胞染色体核型分析结果一致,另外27例结构异常FISH技术未能检出。可以开展各类动、植物、细菌、细胞等生物实验。
原位杂交技术(In situ hybridization,ISH)是分子生物学、组织化学及细胞学相结合而产生的一门新兴技术,始于20世纪60年代。1969年美国耶鲁大学的Gall等(1969)首先用爪蟾核糖体基因探针与其卵母细胞杂交,将该基因进行定位,与此同时Buongiorno—Nardelli和Amaldi等(1970)相继利用同位素标记核酸探针进行了细胞或组织的基因定位,从而创造了原位杂交技术。自此以后,由于分子生物学技术的迅猛发展,特别是20世纪70年代末到80年代初,分子、质粒和噬菌体DNA的构建成功,为原位杂交技术的发展奠定了深厚的技术基础。用Parafilm膜封好主平板,倒置贮放于4℃,直至获得杂交反应的结果裂解细菌,按本段下面所述方法,使释放的DNA结合于纤维素滤膜。
武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年,是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司;公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台;方法应用FISH技术分析110例血尿患者尿脱落细胞染色体异常情况,其中包括86例、泌尿系12例、滤泡(腺性)4例、良性(状瘤)4例、不明原因血尿4例。可以开展各类动、植物、细菌、细胞等生物实验。
荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)是20世纪80年代末在性原位杂交技术基础上发展起来的一种非性分子生物学和细胞遗传学结合的新技术,是以荧光标记取代同位素标记而形成的一种新的原位杂交方法荧光原位杂交技术问世于20世纪70年代后期。1977年,荧光标记的被应用于识别特异性DNA—RNA杂交I I。1980年,J.G.Baunlan等将应用化学偶联的方法将荧光素结合到RNA探针上用于直接的特异性靶序列检测。原位杂交对照试验同组织化学染色对照一样,为证明原位杂交实验操作的准确性和实验结果的特异性,需要设置一系列对照实验,具体的各种对照实验的设置及其意义请参考原位杂交专著,以下仅介绍几种常用的对照实验。荧光原位杂交技术技术原理是将荧光素直接或间接标记的核酸探针[或生物素、、dinit rophenyl(I)NP)、aminoacetylAAFfluorine(AAF)等标记的核酸探针与待测样本中的核酸序列按照碱基互补配对的原则进行杂交,经洗涤后直接在荧光显微镜下观察。
荧光原位杂交技术是一种重要的非性原位杂交技术,原理是利用报告分子(如生物素、等)标记核酸探针,然后将探针与染色体或DNA纤维切片上的靶DNA杂交,若两者同源互补,即可形成靶DNA与核酸探针的杂交体。此时可利用该报告分子与荧光素标记的特异亲和素之间的化学反应,经荧光检测体系在镜下对待DNA进行定性、定量或相对定位分析。4.固定方法组织标本取材后,迅速放入固定液中2~4h,取材组织大小为1cm×1cm×0。 [1]
武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年,是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司;公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台;基因检测定义基因检测:指通过基因芯片等方法对被测者细胞中的DNA分子进行检测,并分析被检测者所含致病基因、疾病易感性基因等情况的一种技术。可以开展各类动、植物、细菌、细胞等生物实验。
组织切片与预处理
冰冻切片:新鲜组织也可在取材后,直接置入液氮中迅速骤冷,冷冻切片后,4%多聚甲醛固定5~10min,也可保存在-70℃中待用。杂交前切片迅速恢复至室温并干燥,0.1mol PBS洗三次,2×SSC洗10min,滴加预杂交液室温孵育1h。
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