试剂盒成分
特异性识别Cdc42活性构象的鼠单克l隆抗l体（Anti-active Cdc42, Mouse MonoclonalAntibody (Catalog No. 26905)）：小管装--30ul (抗l体浓度是1mg/ml)，抗l体溶于PBS（pH7.4）并包含50%的甘油和0.05%的叠氮l化钠。此抗l体可以特异性识别所有脊椎动物中的
IP-WB活性检测试剂盒
试剂盒成分
特异性识别Cdc42活性构象的鼠单克l隆抗l体（Anti-active Cdc42, Mouse MonoclonalAntibody (Catalog No. 26905)）：小管装--30ul (抗l体浓度是1mg/ml)，抗l体溶于PBS（pH7.4）并包含50%的甘油和0.05%的叠氮l化钠。此抗l体可以特异性识别所有脊椎动物中的Cdc42-GTP。
Protein A/G agarose (Catalog No. 30301) ：小管装—400ul包含200ul Protein A/G agarose 和200ul 20%乙醇溶液。（使用时溶液需要充分混匀，再吸取）
5X Assay/Lysis Buffer (Catalog No. 30303)：小瓶装—30mL包含250 mM Tris-HCl (pH 8.0), 750 mM NaCl, 50 mM MgCl2, 5 mM EDTA, 5% Triton X-100。
特异性识别Cdc42活性构象的兔多克l隆抗l体（Anti-Cdc42, Rabbit Polyclonal Antibody (Catalog No.21010)）：小管装--30ul (抗l体浓度是1mg/ml)，抗l体溶于PBS（pH 7.4）并包含有 50%的甘油。
100 X GTPγS (Catalog No. 30302) ：小管装—100ul (10 mM) ，实验中0.5mL细胞裂解液使用 5ul GTPγS标记。
100 X GDP (Catalog No. 30304) ：小管装—100ul (100 mM) ，实验中0.5mL细胞裂解液使用5ul GDP标记。
储存条件
试剂盒的成分在试剂盒的有效期限内必须存放于4°C条件下保存。
试剂（试剂盒内不提供，由实验者自行配置）
1. 刺激和未刺激的细胞裂解物；
2. 蛋白酶抑制l剂；
3. 4 °C 摇杆或者摇床；
4. 0.5 M EDTA (pH 8.0)；
5. 1 M MgCl2；
6. 2X reducing SDS-PAGE sample buffer；
7. 电泳和免l疫印迹相关试剂；
8. 免l疫印迹缓冲液TBST (10 mM Tris-HCl, pH 7.4, 0.15 M NaCl, 0.05%
Tween-20)；
9. 免l疫印迹封闭缓冲液 (TBST containing 5% 脱脂奶粉 or 3% BSA)；
10. PVDF或硝l酸纤维素膜；
11. 二抗；
12. ECL 检测试剂；
检测步骤
Ι。活性Cdc42 Pull-Down实验
1. 等分0.5-1 mL的细胞裂解物至微量离心管中。
2. 向管中加入1mL的1X Assay/Lysis 缓冲液。
3. 向管中加入1ul的活性Cdc42单克l隆抗l体。
4. 用涡旋振荡仪将protein A/G凝胶柱充分混匀，然后的吸出20ul悬浮珠浆液加入离心管中。
5. 将管置于4°C条件下孵育1H，并轻轻的进行摇动。
6. 5000g，离心1分钟。
7. 弃上清，这一步要非常小心以避免珠子的损失。
8. 用0.5 mL的1X Assay/Lysis缓冲液洗涤珠子三次，离心并弃去上清。
9. 后一次洗涤后，小心的移去所有的上清。
10. 用20ul的2X SDS-PAGE样品缓冲液重悬样品。
11. 样品煮沸5min。
12. 5000g，离心10s。
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