1.抗活性Arf 6,小鼠单克l隆抗l体(货号26918):一小瓶– 22 μL(1
含50%甘油和0.05%叠氮l化钠的PBS(pH 7.4)中的浓度(mg / ml)。 该抗l体特异性识别所有脊椎动物的Arf 6-GTP。
2.蛋白A / G琼脂糖(目录号30301):一小瓶– 400 μL 50%浆液。
3. 5X测定/裂解缓冲液(
Rab5C 蛋白
1.抗活性Arf 6,小鼠单克l隆抗l体(货号26918):一小瓶– 22 μL(1
含50%甘油和0.05%叠氮l化钠的PBS(pH 7.4)中的浓度(mg / ml)。 该抗l体
特异性识别所有脊椎动物的Arf 6-GTP。
2.蛋白A / G琼脂糖(目录号30301):一小瓶– 400 μL 50%浆液。
3. 5X测定/裂解缓冲液(目录号30302):一瓶– 30 mL的250 mM Tris-HCl,pH 8,750mM NaCl,50 mM MgCl2,5 mM EDTA,5%Triton X-100。
4.抗Arf 6,兔多克l隆抗l体(货号21032):一小瓶– 100 μL(1 mg / ml)
pH 7.4的PBS中含有50%的甘油。
5. 100 XGTPγS(目录号30303):1瓶– 100 μl,10 mM,使用5 μLGTPγS标记0.5 mL细胞裂解液。
6. 100 X GDP(产品目录号30304):一个样品瓶– 100 μl,100 mM,使用5 μL GDP标记0.5 mL细胞裂解物。
测定步骤
I.主动Arf 6下拉分析
1.将0.5 – 1 mL细胞裂解液等分到微量离心管中。
2.使用1X分析/裂解缓冲液将每个样品的体积调整为1 mL。
3.在管中加入1 μl抗活性Arf 6单克l隆抗l体。
4.通过涡旋或滴定重悬蛋白A / G琼脂糖珠浆。
5.向每个管中添加20 μL重悬浮的珠浆。
6.轻轻搅拌将试管在4°C下孵育1小时。
7.通过以5,000 x g离心1分钟来沉淀小珠。
8.吸出并丢弃上清液,确保不要干扰/除去珠粒。
9.用0.5 mL的1X Assay / Lysis Buffer洗涤磁珠3次,每次离心并吸出。
10.后一次洗涤后,将珠粒沉淀并小心除去所有上清液。
11.将磁珠沉淀重悬于20 μL 2X还原SDS-PAGE样品缓冲液中。
12.将每个样品煮沸5分钟。
13.以5,000 x g的速度离心每个样品10秒钟。
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电泳与转移
1.将15 μL /孔的下拉上清液加到聚丙l烯酰胺凝胶(17%)中。 而且,
建议包含预先染色的MW标准(作为步骤3中成功转移的指标)。
2.按照制造商的说明执行SDS-PAGE。
3.按照制造商的说明将凝胶蛋白转移到PVDF或硝l酸纤维素膜上。
基因符号:RAB11
说明:抗活性Rab11小鼠单克l隆抗l体
背景:Rab系列的小GTP酶是控制膜运输的机械的关键要素。 Rab11已显示可控制通过回收内体的运输。
免l疫原:活性Rab11的重组全长蛋白
应用范围:IP,IHC
推荐的稀释液:IP:1μg,用于12 mg总细胞蛋白
IHC:1:50100稀释
浓度:1 mg / ml
格式:液体
同种型:IgG2b
纯度:从腹l水中纯化
存储缓冲区:
防腐剂:否
成分:PBS(不含Mg2 +和Ca2 +),pH 7.4、150 mM NaCl,50%甘油
种属反应性:抗活性Rab11抗l体识别来自脊椎动物的活性Rab11。
储存条件:储存于-20°C。 避免冻结/解冻周期
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