武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年,是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司;公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台;可以开展各类动、植物、细菌、细胞等生物实验。(7)加显色液,封口膜覆盖,避光室温孵育2~20h,随时镜检,当显色满意时入缓冲液Ⅲ终止显色。
原位杂交检测
武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年,是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司;公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台;可以开展各类动、植物、细菌、细胞等生物实验。(7)加显色液,封口膜覆盖,避光室温孵育2~20h,随时镜检,当显色满意时入缓冲液Ⅲ终止显色。
基因组原位杂交(Genome in situ hybridization,GISH)技术是20世纪80年代末发展起来的一种原位杂交技术。将这些菌落归并到一个琼脂主平板以及已置于第二个琼脂平板表面的一张纤维素滤膜上。它主要是利用物种之间DNA同源性的差异,用另一物种的基因组DNA以适当的浓度作封阻,在靶染色体上进行原位杂交。GISH技术应用于动物方面的研究(Pinkel et al.,1986),在植物上早应用于小麦和栽培种的鉴定(余舜武等 2001;王文奎等 2000)。
武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年,是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司;公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台;可以开展各类动、植物、细菌、细胞等生物实验。阳性对照用已知含靶序列的组织切片与待检标本同样处理,结果应为阳性,称阳性对照。
用于原位杂交的探针可以是单链或双链DNA,也可以是RNA探针。用原位杂交技术,可在原位研究细胞合成某种多肽或蛋白质的基因表达。通常探针操作的长度以100-400nt为宜,过长则杂交率减低。近研究结果表明,寡核苷酸探针(16-30 nt)能自由出入细菌和组织细胞壁,杂交效率明显高于长探针,因此,寡核苷酸探针和不对称PCR标记的小DNA探针或体外转录标记的RNA探针是组织原位杂交优选探针。
武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年,是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司;公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台;可以开展各类动、植物、细菌、细胞等生物实验。根据异源单链核酸分子间因结构互补发生共价键结合,能形成互补杂合双链,而进行分子遗传学研究的一种技术。
与其他原位杂交技术相比,荧光原位杂交具有很多优点,主要体现在:①FISH不需要性同位素标记,更经济安全。荧光原位杂交技术是一种重要的非性原位杂交技术,原理是利用报告分子(如生物素、等)标记核酸探针,然后将探针与染色体或DNA纤维切片上的靶DNA杂交,若两者同源互补,即可形成靶DNA与核酸探针的杂交体。②FISH的实验周期短,探针稳定性高,特异性好,定位准确,能迅速得到结果。③FISH通过多次化学反应,使杂交信号增强,灵敏度提高,其灵敏度与性探针相当。④多色FISH通过在同一个核中显示不同的颜色可同时检测多种序列。⑤既可以在玻片上显示中期染色体数量或结构的变化。也可以在悬液中显示间期染色体DNA的结构。 [1]
武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年,是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司;公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台;可以开展各类动、植物、细菌、细胞等生物实验。2)置换成30%的PBST溶液,放置5分钟3)置换成PBST溶液,放置5分钟,重复一次4)置换成4%多聚甲醛的PBS溶液固定20分钟5)用PBST洗两次,每次放置五分钟,室温。
原位杂交对照试验
同组织化学染色对照一样,为证明原位杂交实验操作的准确性和实验结果的特异性,需要设置一系列对照实验,具体的各种对照实验的设置及其意义请参考原位杂交专著,以下仅介绍几种常用的对照实验。
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