武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年,是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司;公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台;可以开展各类动、植物、细菌、细胞等生物实验。发育时间越短的胚胎越嫩,可以不用或者少用蛋白酶处理,发育时间长的胚胎就需要用蛋白酶来疏松组织,以便于杂交。
原位杂交
武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年,是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司;公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台;可以开展各类动、植物、细菌、细胞等生物实验。发育时间越短的胚胎越嫩,可以不用或者少用蛋白酶处理,发育时间长的胚胎就需要用蛋白酶来疏松组织,以便于杂交。
利用核酸杂交技术进行定性或定量分析的方法是将一种核酸单链用同位素或荧光物质标记,制成探针(见核酸分子探针),再与另一种核酸单链杂交核酸分子杂交有液相和固相两种方法。,1986),在植物上早应用于小麦和栽培种的鉴定(余舜武等2001。液相法的核酸单链分子都在溶液中,通过分子运动进行杂交固相法是将一种核酸单链固定在不溶性的介质上。另一种核酸单链在溶液中与固定的核酸分子进行杂交。常用的固相介质有纤维膜、尼龙纤维膜、琼脂糖和聚酰胺凝胶等。 [
武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年,是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司;公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台;可以开展各类动、植物、细菌、细胞等生物实验。阳性与阴性结构同在一个视野中,相互印证,这本身就是对阳性反应的特异性对照。
切片及细胞标本的制备
载玻片的处理 因为原位杂交一般在载玻片上进行,所以载玻片必须保持清洁且不能有任何核酸酶的污染。目前基因检测的方法主要有:荧光定量PCR、基因芯片、液态生物芯片与微流控技术等。一般载玻片可先经洗衣粉浸泡过夜,用流水冲洗、酸中浸泡4~8h,再用流水冲洗,双蒸水洗2~3次。在160℃烤箱中烘烤2~4h。亦可经15磅高压灭菌20min处理,可将载玻片上的核酸酶消除。
武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年,是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司;公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台;可以开展各类动、植物、细菌、细胞等生物实验。2mol/LHCl处理载玻片,用蛋白酶K消化,然后用不同浓度的乙醇脱水。
组织切片与预处理
冰冻切片:新鲜组织也可在取材后,直接置入液氮中迅速骤冷,冷冻切片后,4%多聚甲醛固定5~10min,也可保存在-70℃中待用。杂交前切片迅速恢复至室温并干燥,0.1mol PBS洗三次,2×SSC洗10min,滴加预杂交液室温孵育1h。
武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年,是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司;公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台;可以开展各类动、植物、细菌、细胞等生物实验。将这些菌落归并到一个琼脂主平板以及已置于第二个琼脂平板表面的一张纤维素滤膜上。
原位杂交对照试验
同组织化学染色对照一样,为证明原位杂交实验操作的准确性和实验结果的特异性,需要设置一系列对照实验,具体的各种对照实验的设置及其意义请参考原位杂交专著,以下仅介绍几种常用的对照实验。
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