免l疫印迹和检测（所有步骤均在室温下搅拌）
1.在电印迹步骤之后，将PVDF膜浸入100％甲l醇中15秒钟，然后使其在室温下干燥5分钟。注意：如果使用硝l酸纤维素代替PVDF，则应跳过此步骤。
2.在室温下不断搅拌下，在TBST中用5％脱脂奶粉或3％BSA封闭膜1小时。
将膜与抗Arf 6兔多克l隆抗l体在5％脱脂奶粉或3％BSA / T
G蛋白活性检测试剂盒
免l疫印迹和检测（所有步骤均在室温下搅拌）
1.在电印迹步骤之后，将PVDF膜浸入100％甲l醇中15秒钟，然后使其在室温下干燥5分钟。
注意：如果使用硝l酸纤维素代替PVDF，则应跳过此步骤。
2.在室温下不断搅拌下，在TBST中用5％脱脂奶粉或3％BSA封闭膜1小时。
将膜与抗Arf 6兔多克l隆抗l体在5％脱脂奶粉或3％BSA / TBST中以1：501000（取决于样品中Arf 6蛋白质的量）新鲜稀释，孵育1-在室温下持续搅拌2小时或
过夜4oC。
3.用TBST将印迹的膜清洗3次，每次5分钟。
4.将膜与二抗（例如山羊抗兔IgG，HRP偶联物）一起孵育，在室温下以恒定的比例在5％脱脂奶粉或3％BSA / TBST中以1：1000的比例新鲜稀释。搅动。
5.用TBST将印迹的膜清洗3次，每次5分钟。
6.使用您选择的检测方法，例如ECL。
Arf样蛋白1（Arl1）是GTpases的Ras超家族中的调控性GTPases Arf家族的成员，并且在整个真核生物中都具有高度保守的直系同源基因。 Arl1对果蝇和秀丽隐杆线虫的早期胚胎发育至关重要。 Arl1在主要序列，细胞定位和功能（膜运输调节）上与Arf1-6较相似，甚至共享几个共同的结合伴侣。 除了其在高尔基体/反式高尔基体网络中的膜运输功能中，还有报道表明Arl1在酵母中的离子稳态中可能发挥作用。
Arf6激l活测定。 经GDP（lane1）或GTPγS（lane 2）处理后，纯化的Arf6蛋白被免l疫沉淀。 用抗活性Arf6单克l隆抗l体进行免l疫沉淀。
体外用GTPγS/GDP处理蛋白以用作阳性和阴性的对照
注意：在细胞体内环境条件下大约有10%的Cdc42被激l活，而在体外用GTPγS处理大约有90%的Cdc42被激l活。
1. 准备两个离心管，每个管中各加入0.5 mL的细胞提取物（如果是纯的Cdc42蛋白则每个管中加入的蛋白量为1ug）。
2. 每个管中加入20ul 0.5M EDTA(终浓度即为20 mM)。
3. 一个管中加入5ul的100X GTPγS（终浓度即为100 uM）作为阳性对照。另一个管中加入5ul的100X GDP（终浓度即为1 mM）作为阴性对照。
4. 将离心管置于30°C条件下反应30min并不断搅动。
5. 终止反应：将管置于冰上并加入32.5ul 1M MgCl2(终浓度即为60mM)。
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