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G蛋白活性检测试剂盒性价比出众

1. VASP通过调节Rab11依赖性TGF-β受体的质膜靶向来促进肝星状细胞的TGF-β活化 肝l病学第61卷,首1期,第361-374页,2015年1月 2. Rab5活性调节GLUT4分类为胰岛素反应性和非胰岛素反应性内体室:胰岛素抵抗发展的潜在机制。 内分l泌学。 2014年9月; 155(9):3315-28
G蛋白活性检测试剂盒














1. VASP通过调节Rab11依赖性TGF-β受体的质膜靶向来促进肝星状细胞的TGF-β活化

肝l病学第61卷,首1期,第361-374页,2015年1月

2. Rab5活性调节GLUT4分类为胰岛素反应性和非胰岛素反应性内体室:胰岛素抵抗发展的潜在机制。

内分l泌学。 2014年9月; 155(9):3315-28

将裂解液转移到适当大小的试管中,并置于冰上。

如果发生核裂解,则细胞裂解液可能变得非常粘稠,难以移液。 如果发生这种情况,可将裂解液通过27号注射l器针头3-4次以剪切基因组DNA。

通过离心10分钟(在4°C下为12,000 x g)清除裂解物。

收集上清液并将样品保存在冰上以备立即使用,或速冻并保存在-70°C以便将来使用。









阳性对照和阴性对照的体外GTPγS/ GDP蛋白质上样量

注意:体内细胞刺激将激l活可用Arf 6的大约10%,而体外GTPγS蛋白负载将激l活Arf 6的将近90%。

1,将0.5 ml每种细胞提取物等分到两个微量离心管中(或使用1 μg纯化的Arf 6蛋白)。

2,向每个试管中加入20 μl 0.5 M EDTA(终浓度为20 mM)。

3,将5 μl 100 XGTPγS(至100 μM,终浓度)加到一个试管中(阳性对照)。

4,在第二个试管中加入5 μl 100 X GDP(至1 mM,终浓度)(阴性对照)。

5,在搅拌下将试管在30°C孵育30分钟。

6,通过将试管放在冰上并添加32.5 μl 1 M MgCl2(至60 mM,终浓度)来停止加载。









测定步骤

I.主动Arf 6下拉分析

1.将0.5 – 1 mL细胞裂解液等分到微量离心管中。

2.使用1X分析/裂解缓冲液将每个样品的体积调整为1 mL。

3.在管中加入1 μl抗活性Arf 6单克l隆抗l体。

4.通过涡旋或滴定重悬蛋白A / G琼脂糖珠浆。

5.向每个管中添加20 μL重悬浮的珠浆。

6.轻轻搅拌将试管在4°C下孵育1小时。

7.通过以5,000 x g离心1分钟来沉淀小珠。

8.吸出并丢弃上清液,确保不要干扰/除去珠粒。

9.用0.5 mL的1X Assay / Lysis Buffer洗涤磁珠3次,每次离心并吸出。

10.后一次洗涤后,将珠粒沉淀并小心除去所有上清液。

11.将磁珠沉淀重悬于20 μL 2X还原SDS-PAGE样品缓冲液中。

12.将每个样品煮沸5分钟。

13.以5,000 x g的速度离心每个样品10秒钟。






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