纽斯特生物技术有限公司推出的Cdc42活性检测试剂盒主要是依据单克l隆抗l体能够特异性的识别Cdc42-GTP结合蛋白，而不识别Cdc42-GDP结合蛋白，进而简单并且的进行Cdc42的活性检测。同时试剂盒中的Cdc42-GTP单克l隆抗l体也可以进行免l疫组化实验中细胞和组织中Cdc42的活性监测。每套试剂盒可以进行20次检测。
体外用
IP-WB 活性检测试剂盒
纽斯特生物技术有限公司推出的Cdc42活性检测试剂盒主要是依据单克l隆抗l体能够特异性的识别Cdc42-GTP结合蛋白，而不识别Cdc42-GDP结合蛋白，进而简单并且的进行Cdc42的活性检测。同时试剂盒中的Cdc42-GTP单克l隆抗l体也可以进行免l疫组化实验中细胞和组织中Cdc42的活性监测。每套试剂盒可以进行20次检测。
体外用GTPγS/GDP处理蛋白以用作阳性和阴性的对照
注意：在细胞体内环境条件下大约有10%的Cdc42被激l活，而在体外用GTPγS处理大约有90%的Cdc42被激l活。
1. 准备两个离心管，每个管中各加入0.5 mL的细胞提取物（如果是纯的Cdc42蛋白则每个管中加入的蛋白量为1ug）。
2. 每个管中加入20ul 0.5M EDTA(终浓度即为20 mM)。
3. 一个管中加入5ul的100X GTPγS（终浓度即为100 uM）作为阳性对照。另一个管中加入5ul的100X GDP（终浓度即为1 mM）作为阴性对照。
4. 将离心管置于30°C条件下反应30min并不断搅动。
5. 终止反应：将管置于冰上并加入32.5ul 1M MgCl2(终浓度即为60mM)。
检测步骤
Ι。活性Cdc42 Pull-Down实验
1. 等分0.5-1 mL的细胞裂解物至微量离心管中。
2. 向管中加入1mL的1X Assay/Lysis 缓冲液。
3. 向管中加入1ul的活性Cdc42单克l隆抗l体。
4. 用涡旋振荡仪将protein A/G凝胶柱充分混匀，然后的吸出20ul悬浮珠浆液加入离心管中。
5. 将管置于4°C条件下孵育1H，并轻轻的进行摇动。
6. 5000g，离心1分钟。
7. 弃上清，这一步要非常小心以避免珠子的损失。
8. 用0.5 mL的1X Assay/Lysis缓冲液洗涤珠子三次，离心并弃去上清。
9. 后一次洗涤后，小心的移去所有的上清。
10. 用20ul的2X SDS-PAGE样品缓冲液重悬样品。
11. 样品煮沸5min。
12. 5000g，离心10s。
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