3D细胞培养
3D多细胞肿liu球是在体外应用组织培养方法使肿liu细胞以多细胞集聚体的形式生长成为具有三维结构的球体。与传统的2D贴壁细胞培养模型相比，3D多细胞肿liu球可以通过模拟三维细胞网络、细胞与基质、细胞与细胞之间的相互作用，从而更加贴近肿liu组织中相应的病理生理特征。因此, 3D多细胞肿liu球培养模型已经逐渐应用于gan细胞培养和分化、ai症研究、yao
透射电镜自噬小体检测
3D细胞培养
3D多细胞肿liu球是在体外应用组织培养方法使肿liu细胞以多细胞集聚体的形式生长成为具有三维结构的球体。与传统的2D贴壁细胞培养模型相比，3D多细胞肿liu球可以通过模拟三维细胞网络、细胞与基质、细胞与细胞之间的相互作用，从而更加贴近肿liu组织中相应的病理生理特征。因此, 3D多细胞肿liu球培养模型已经逐渐应用于gan细胞培养和分化、ai症研究、yao物和毒性筛选及组织工程等特定应用中。虽然3D多细胞肿liu球模型具有更显著的实体肿liu生理相关性，但是与2D贴壁细胞培养模型相比，获得大量相对统一的3D多细胞肿liu球模型需要-系列的培养过程和表征手段。
透射电镜观察自噬小体方法
利用光学显微镜，借助相应的染色方法，可以观察细胞凋亡时会出现的一系列形态特征。常用的染色法包括台盼蓝、橙 / 化乙啶（AO/EB）、Giemsa 和 HE 法等。在光学显微镜下可以观察到核固缩、质浓缩和凋亡小体等典型的凋亡现象。
电镜形态学观察法是一种比较经典、可靠的方法，被认为是确定细胞凋亡的金标准。电镜下凋亡细胞表现为染色质凝集、核浓缩、核裂解、胞浆收缩和胞膜具有发泡现象及凋亡小体出现等。
大鼠gu髓间充质gan细胞的分离
操作方法
(1 )取SD大鼠( 2周龄)，颈椎脱臼法处死后立即用75%乙醇浸泡，移入超净工作台内，用大头针固定大鼠四肢于工作台面的泡沫板上。
(2)碘酒擦拭四肢，再用酒精棉球擦拭，无菌条件下用灭菌消毒后的镊子和剪刀分离出大鼠股骨和胫骨，剔除骨头表面肌肉, PBS溶液冲洗两遍。
(3 )从中间剪断股骨和胫骨，用2ml无菌注she器吸取DMEM/F 12溶液冲出gu髓细胞多次，再用针头吹打，吸管吸入离心管内，1000r/min离心5min，弃上清，用PBS重悬细胞。
(4 )缓慢将细胞悬液加入预先装有5mL淋巴细胞分离液的15mL离心管内，保持细胞悬液在淋巴细胞分离液上层，注意不要搅动液面,保持二者分层界面。
(5 ) 2000rpm离心15-25min，离心后溶液分4层，吸取中间骨sui基质细胞层(白色浑浊状)， PBS洗三次。
(6)用含15%胎牛xue清及青链mei素的DMEM/F 12以106/mL的细胞浓度接种于25cm2培养瓶中， 置37°C、5%CO2恒温培养箱中培养。
( 7 ) 24小时后弃去培养液(看细胞贴壁情况)，PBS冲洗2-3次去除末贴壁细胞，加入培养液继续培养。以后每3d半量换液1次，-般10d细胞生长融合。
(8 )经0.25%胰酶消化，1 : 2传代，其后一般3-5d传代1次,选取生长良好的第三代细胞进行后续实验。
BrdU染色原理
BrdU (5-脱氧尿核苷)是胸腺的衍生物，常用于标记中新合成的DNA,可代替胸腺选择性整合到细胞中新合成的DNA中(细胞周期S期)。这种掺入可以稳定存在，随着DNA进入子细胞中BrdU特异性可以用于检测BrdU的掺入，从而判断细胞的增殖能力。BrdU特异性可以用于检测BrdU的掺入，从而判断细胞的增殖能力。
注射或细胞培养后利用抗Brdu单，ICC染色，显示增殖细胞。同时结合其它细胞标记物，双重染色，可判断增殖细胞的种类，增殖速度，对研究细胞动力学有重要意义。因组织细胞内无内源性Brdu存在，所以Brdu应用较广掺入双链DNA内的Brdu,以氢链与腺呤结合，不能直接与抗Brdu反应，需经解链使Brdu暴露方能被染色。常用的解链方法为盐酸加热、蛋白酶处理等，使DNA双链部分单链化，抗Brdu小鼠单与增殖细胞核内的Brdu结合，再经酶标抗小鼠IgG孵育、
呈色，显示进入S期细胞的情况。
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