武汉纽斯特生物科技有限公司(WuhanNewEastBiotechonologyCo.Ltd),系美国生命科学试剂供应商美国NewEastBio在的子公司。公司位于武汉东湖高新技术开发区光谷生物城.美国NewEastBio专注于生命科学和生物技术领域,主要产品有小分子、ELISA试剂盒、蛋白等,与世界高校和研究所、世界大制药公司、生物科技公司和医院等客户建立了长期稳
G13-GTP
武汉纽斯特生物科技有限公司(WuhanNewEastBiotechonologyCo.Ltd),系美国生命科学试剂供应商美国NewEastBio在的子公司。公司位于武汉东湖高新技术开发区光谷生物城.美国NewEastBio专注于生命科学和生物技术领域,主要产品有小分子、ELISA试剂盒、蛋白等,与世界高校和研究所、世界大制药公司、生物科技公司和医院等客户建立了长期稳定的合作关系,产品销往。
NewEast Biosciences Arf6激l活检测试剂盒基于特定于配置的单克l隆抗l体和Arf6特异性兔多克l隆抗l体,该抗l体特异性识别Arf6-GTP,但不能识别Arf6-GDP。 鉴于单克l隆抗l体对其抗原的高度亲和力,可以在短时间内进行激l活测定。 该测定法可提供可靠的结果,并具有一致的可重复性。
纽斯特生物技术有限公司推出的Cdc42活性检测试剂盒主要是依据单克l隆抗l体能够特异性的识别Cdc42-GTP结合蛋白,而不识别Cdc42-GDP结合蛋白,进而简单并且的进行Cdc42的活性检测。同时试剂盒中的Cdc42-GTP单克l隆抗l体也可以进行免l疫组化实验中细胞和组织中Cdc42的活性监测。每套试剂盒可以进行20次检测。
电泳和转膜
1. 取15ul样品/孔上样17%配体胶。
2. 按照制造商的说明进行SDS-PAGE。
3. 按照制造商的说明将凝胶蛋白转到PVDF或硝化纤l维素膜。
免l疫印迹反应和检测(所有步骤都是在室温下进行,并不断搅拌)
1. 将PVDF膜浸入甲l醇15s,然后在室温放置5 min晾干。
注意:如果使用的是硝化纤l维素膜,此步省略。
2. 封闭:用TBST缓冲液配制5%的脱脂牛奶或者3%BSA在室温下孵育1H进行封闭,并需要恒定振荡。
3. 孵育一抗:用TBST缓冲液配制的5%脱脂牛奶或3%BSA稀释特异性识别Cdc42活性构象的兔多克l隆抗l体(稀释比例为1:50-1:1000,主要根据样品中含有的Cdc42蛋白的量),室温下孵育1-2小时,或者4°C条件下过夜孵育。
4. 用TBST缓冲液洗涤膜三次/5min。
5. 孵育二抗:(例如羊抗兔IgG-HRP),用TBST缓冲液配制的5%脱脂牛奶或3%BSA按1:1000稀释比例稀释后使用,室温下孵育1小时并恒定振荡。
6. 用TBST缓冲液洗涤膜三次/5min。
7. 使用实验者所选择的检测方法进行显色如ECL显色法。
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