武汉迈斯普生物科技有限公司是一家从事生物医学技术服务、技术咨询及产品开发的生物技术服务企业。公司坐落于武汉光谷,由3位归国博士创办。公司长期致力于建立并完善多项基础生物技术服务平台。现凭借自身技术特色,依托光谷生物城技术产业优势,面向提供的生物技术服务。
外泌体是指包含了复杂 RNA 和蛋白质的小膜泡 (30-150nm),现今,其特指直径在40-100nm的盘状囊泡。
外泌体电镜检测
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外泌体是指包含了复杂 RNA 和蛋白质的小膜泡 (30-150nm),现今,其特指直径在40-100nm的盘状囊泡。1983年,外泌体于绵羊网织红细胞中被发现, 1987年Johnstone将其命名为“exosome”。外泌体的鉴定:由于外泌体的特殊性,在外泌体分离后,需要进行形态、粒径、表面分子标记物等多方面的鉴定。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体,经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中 。
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一类外泌体中常见的细胞质蛋白是Rabs蛋白,是鸟苷酸三磷酸酶(GTPases,)家族的一种。它可以调节外泌体膜与受体细胞的融合,有文献报道称RAB4, RAB5和 RAB11主要出现在早期以及回收的核内体中,RAB7 和 RAB9主要出现在晚期的核内体。外泌体主要来源于细胞内多泡体(multivesicularbody,MVB)途径。现有大量的研究发现外泌体中含有40种RAB蛋白。除了RAB蛋白,外泌体中富含具有外泌体膜交换以及融合作用的膜联蛋白(包括膜联蛋白1、2、4、5、6、7、11等)。
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尽管外泌体在血液、尿液、乳液和唾液等体液中含量丰富,但是体液中其他种类的细胞外囊泡及生物分子往往会对其检测结果产生干扰。外泌体电镜分析双层囊膜结构(茶托状)是外泌体重要标志之一,但普通光学显微镜难以观察到此种亚显微结构。因此外泌体检测首先需要对其进行分离纯化,然后通过形态学检测或特异性表面蛋白标志物鉴定后才能对下游的蛋白和核酸分子进行分析。
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外泌体具有尺寸小、密度低以及生物流体性复杂等特点,这对外泌体的分离和纯化提出了重大的挑战。外泌体分离纯化方法一般基于外泌体的物理化学特性,如尺寸、密度、质量、表面蛋白等。尽管外泌体在血液、尿液、乳液和唾液等体液中含量丰富,但是体液中其他种类的细胞外囊泡及生物分子往往会对其检测结果产生干扰。外泌体的分离纯化技术有很多,包括离心、过滤、聚合物沉淀、磁珠以及新兴的微流控芯片等方法,但这些方法目前仅用于科学研究,还不能达到临床检测要求。
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