目前商业化提供的一些cAMP检测试剂盒主要应用ELISA的方案,使用的是非亲和纯化的cAMP多克l隆抗l体,尽管具有灵敏性,这些多克l隆抗l体与ATP存在一定程度的交叉反应。基于ATP是cAMP生产的底物,很有必要找到一种能高特异性识别cAMP的抗l体。
纽斯特生物开发出了鼠单克l隆抗l体的cAMP ELISA 检测试剂盒。该单克l隆抗l体对cAMP的特异性
人环磷酸腺苷 cAMP ELISA
目前商业化提供的一些cAMP检测试剂盒主要应用ELISA的方案,使用的是非亲和纯化的cAMP多克l隆抗l体,尽管具有灵敏性,这些多克l隆抗l体与ATP存在一定程度的交叉反应。基于ATP是cAMP生产的底物,很有必要找到一种能高特异性识别cAMP的抗l体。
纽斯特生物开发出了鼠单克l隆抗l体的cAMP ELISA 检测试剂盒。该单克l隆抗l体对cAMP的特异性比cAMP、ATP等类似的小分子高出108 倍以上。相较于其他的多克l隆抗l体cAMP试剂盒,纽斯特生物cAMP ELISA试剂盒能显著的提高其灵敏性和特异性,且能有效避免来自动物多克l隆抗l体的批次间差异, 因此可以提供长久有效地可重复性定量检测。
对于生长的组织培养液中的细胞,首先移除培养基,然后加入0.1M HCl处理细胞。孵育10分钟并观察细胞是否被裂解;如果裂解不充分,接着孵育10分钟并观察。以大于600g离心力于室温离心,收集上清直接用于实验。临用前在0.1M HCl中加入0.1%至1%浓度的Triton-x 100可增强细胞和组织裂解。在这个浓度范围内,去污剂并不干扰试验的结合部位,但是会适度的增加光密度值。含有Triton的样品需利用标准曲线估计浓度,为了较精l确的测定,标准曲线需以相同方式稀释。取1 mL细胞培养上清加入10μL浓盐酸,600g离心力于室温离心,上清液直接用于实验测定分析。
灵敏度
通过比较10个B0孔平均光密度值(OD)和10个5号管标准品的平均光密度值,计算出灵敏度。cAMP浓度的检测极限通过标准曲线上0位置的两个标准偏差来测定。
OD(B0平均数) =0.685± 0.003
OD(5号 标准品平均数)=0.604± 0.010
光密度偏差(0-0.4 pmol/mL) =0.081
2 SD's of the Zero Standard =0.006
灵敏度 =081.0006.0/0.8×0.4 pmol/mL =29.6 fmol/mL

因此为筛选出腺苷酸环化酶的激l活剂或磷酸二酯酶的抑制l剂,需要一个高敏感度、特异性的、可重复的方案用于检测cGMP的含量。考虑到大分子的化合物可能存在较弱的影响,这一个初筛是有必要的。
目前商业化提供的一些cGMP检测试剂盒主要使用的是非亲和纯化的cGMP多克l隆抗l体。尽管据称有特异性,但这些多克l隆抗cGMP抗l体与cAMP和GTP呈现一定程度的交叉反应。且在大多数细胞类型中,cGMP含量cAMP 100倍。
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