软gu细胞培养
(1)豚鼠脱颈处死,备皮,用75%酒精消毒背部及四肢皮肤。
(2)无菌操作下取下双侧股骨头及膝关节(保留周围肌肉,软gu不能暴露),75%酒精浸泡5分钟,转移至PBS缓冲液中,带入超净工作台,剔除关节周围附着的软组织,打开髋、膝关节,用尖刀削取关节软gu组织,置入装有PBS缓冲液的无菌培养皿,防止软gu组织被风干。
(3)PBS缓冲液充分漂洗软
单细胞测序技术
软gu细胞培养
(1)豚鼠脱颈处死,备皮,用75%酒精消毒背部及四肢皮肤。
(2)无菌操作下取下双侧股骨头及膝关节(保留周围肌肉,软gu不能暴露),75%酒精浸泡5分钟,转移至PBS缓冲液中,带入超净工作台,剔除关节周围附着的软组织,打开髋、膝关节,用尖刀削取关节软gu组织,置入装有PBS缓冲液的无菌培养皿,防止软gu组织被风干。
(3)PBS缓冲液充分漂洗软gu小块3次,然后用小剪刀将软gu块切碎至约Imm3大小。
(4)再次用PBS缓冲液冲洗3次,滤干,将细小的软gu块置入放有0.2%的II型胶原酶3ml的广口瓶里,摇匀后置于37°C恒温震荡箱中消化,40分钟后将上层消化液转移至15ml规格离心管中,800r/min离心5min,收集细胞(沉淀物),加入含10%的胎牛xue清DMEM培养液4ml并吹打混匀,制成软gu细胞混悬液。
(5)把消化所得的软gu细胞混悬液收集于离心管中,经滤网过滤后用细胞计数板计数,并把细胞混悬液密度调整为2x105/ml接种于25cm2规格的培养瓶中。将培养瓶放置于CO2培养箱内。培养条件为37°C、5%CO2。
(6)未消化完的软gu小块继续用II型胶原酶如_上法消化,直至软gu块基本消失。
(7)每日在倒置显微镜下观察软gu细胞生长情况并拍照保存。
细胞检测服务
作为生物体结构和功能的基本单位,细胞在机体的各项新陈代谢的生命活动中发挥着重要的作用,与此同时,细胞的生理过程,在一定程度上也是机体生命活动的反应。因此利用多种精密仪器,结合特异性的检测试剂,对体外培养的细胞直接检测其增殖的基本过程,或对细胞进行不同的处理后检测细胞生活周期内各项指标的变化,从而深入揭示细胞新陈代谢的具体机制。

BrdU染色原理
BrdU (5-脱氧尿核苷)是胸腺的衍生物,常用于标记中新合成的DNA,可代替胸腺选择性整合到细胞中新合成的DNA中(细胞周期S期)。这种掺入可以稳定存在,随着DNA进入子细胞中BrdU特异性可以用于检测BrdU的掺入,从而判断细胞的增殖能力。BrdU特异性可以用于检测BrdU的掺入,从而判断细胞的增殖能力。
注射或细胞培养后利用抗Brdu单,ICC染色,显示增殖细胞。同时结合其它细胞标记物,双重染色,可判断增殖细胞的种类,增殖速度,对研究细胞动力学有重要意义。因组织细胞内无内源性Brdu存在,所以Brdu应用较广掺入双链DNA内的Brdu,以氢链与腺呤结合,不能直接与抗Brdu反应,需经解链使Brdu暴露方能被染色。常用的解链方法为盐酸加热、蛋白酶处理等,使DNA双链部分单链化,抗Brdu小鼠单与增殖细胞核内的Brdu结合,再经酶标抗小鼠IgG孵育、

呈色,显示进入S期细胞的情况。
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