1.刺激的和非刺激的细胞裂解液
2.蛋白酶抑l制剂
3. 4°C管摇杆或摇床
4. 0.5 M EDTA,pH8.0
5. 1 M氯化镁
6. 2倍还原SDS-PAGE样品缓冲液
7.电泳和免l疫印迹系统
8.免l疫印迹洗涤缓冲液,例如TBST(10 mM Tris-HCl,pH 7.4,0.15 M NaCl,0
G蛋白活性检测试剂盒
1.刺激的和非刺激的细胞裂解液
2.蛋白酶抑l制剂
3. 4°C管摇杆或摇床
4. 0.5 M EDTA,pH8.0
5. 1 M氯化镁
6. 2倍还原SDS-PAGE样品缓冲液
7.电泳和免l疫印迹系统
8.免l疫印迹洗涤缓冲液,例如TBST(10 mM Tris-HCl,pH 7.4,0.15 M NaCl,0.05%
吐温20)
9.免l疫印迹封闭缓冲液(TBST包含5%脱脂奶粉或3%BSA)
10. PVDF或硝l酸纤维素膜
11.二抗
12. ECL检测试剂
阳性对照和阴性对照的体外GTPγS/ GDP蛋白质上样量
注意:体内细胞刺激将激l活可用Arf 6的大约10%,而体外GTPγS蛋白负载将激l活Arf 6的将近90%。
1,将0.5 ml每种细胞提取物等分到两个微量离心管中(或使用1 μg纯化的Arf 6
蛋白)。
2,向每个试管中加入20 μl 0.5 M EDTA(终浓度为20 mM)。
3,将5 μl 100 XGTPγS(至100 μM,终浓度)加到一个试管中(阳性对照)。
4,在第二个试管中加入5 μl 100 X GDP(至1 mM,终浓度)(阴性对照)。
5,在搅拌下将试管在30°C孵育30分钟。
6,通过将试管放在冰上并添加32.5 μl 1 M MgCl2(至60 mM,终浓度)来停止加载。
武汉纽斯特生物科技有限公司(WuhanNewEastBiotechonologyCo.Ltd),系美国生命科学试剂供应商美国NewEastBio在的子公司。公司位于武汉东湖高新技术开发区光谷生物城.美国NewEastBio专注于生命科学和生物技术领域,主要产品有小分子、ELISA试剂盒、蛋白等,与世界高校和研究所、世界大制药公司、生物科技公司和医院等客户建立了长期稳定的合作关系,产品销往。
在G蛋白的四个亚家族中,G12/13亚家族的功能尚不清楚。在
这个家族,有两个成员,G12和G13,它们普遍表达。Gα12基因敲除小鼠看上去很正常。Gα13基因敲除小鼠表现出胚胎致死性(~E9.5)。Gα13-/-老鼠胚胎的血管系统有缺陷。G13对受体酪氨酸激酶的诱导也是必不可少的成纤维细胞和内皮细胞的迁移。
(作者: 来源:)