液相色谱仪是属于易学难用的仪器,特别讲究“正确使用”和经验。液相工作者接触多的是流动相,流动相也是造成液相色谱各种问题的主要源头。液相色谱常见的故障一是堵,二是漏。下面就这两分别展开讨论(流动相以甲1醇为例,色谱柱以C18为例) 。
为何会堵
“堵”的表现现象就是柱压异常升高,直接原因就是流路不畅。堵塞的主要位置就是在色谱柱的前端,主要原因就是流动相里有杂质,杂质的主要来源就是
制备液相色谱仪
液相色谱仪是属于易学难用的仪器,特别讲究“正确使用”和经验。液相工作者接触多的是流动相,流动相也是造成液相色谱各种问题的主要源头。液相色谱常见的故障一是堵,二是漏。下面就这两分别展开讨论(流动相以甲1醇为例,色谱柱以C18为例) 。
为何会堵
“堵”的表现现象就是柱压异常升高,直接原因就是流路不畅。堵塞的主要位置就是在色谱柱的前端,主要原因就是流动相里有杂质,杂质的主要来源就是细菌。
液相色谱仪在使用过程中难免会接触到腐蚀性的物质。这些腐蚀性物质不论是气体、液体还是固体,都有可能损坏仪器的材料和零部件,降低色谱仪的使用寿命。在使用时要尽量避免这种情况的出现。 液相色谱仪流动相类型有多种,流动相性质对样品的分离影响很大。
液相色谱仪流动相类型: 1、按组成可分:单组分流动相和多组分流动相。 2、按极性可分:极性流动相、弱极性流动相和非极性流动相。 3、按作用可分:底剂和洗脱剂。 4、按使用方式可分:等度流动相和梯度流动相。 5、按用途可分:己烷、乙1酸乙1酯、乙醇、乙1腈和水等。 采用二元或多元组合溶剂作为流动相,可以灵活调节流动相的极性和增加选择性,改进分离和调整出峰时间。与HIC一样,RPC中溶质也通过疏水性相互作用分配于固定相表面,但是,RPC固定相表面完全被非极性基团所覆盖,表现出强烈的疏水性。
液相色谱仪与气相色谱仪的区别:
1.分析对象的区别
GC:适于能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品;但对高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及高聚物的样品,尤其对大多数生化样品不可检测占有机物的20%
HPLC:适于溶解后能制成溶液的样品(包括有机介质溶液),不受样品挥发性和热稳定性的限制,对分子量大、难气化、热稳定性差的生化样品及高分子和离子型样品均可检测用途广泛,占有机物的80%
2.流动相差别的区别
GC:流动相为惰性,气体组分与流动相无亲合作用力,只与固定相有相互作用。
HPLC:流动相为液体,流动相与组分间有亲合作用力,能提高柱的选择性、改善分离度,对分离起正向作用。且流动相种类较多,选择余地广,改变流动相极性和pH值也对分离起到调控作用,当选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相也可以增大分离选择性。这也是我们常说的液相色谱仪至少一周要开机一次的原因(我们做液相一定要有“微渗”的概论)。
液相色谱仪的保养维护与气相色谱仪没有多大区别,液相色谱仪的几个维护保养的部件,液相色谱仪的主要部件有色谱柱、进样器、检测器、泵,下面我们分别来说明这几大部件的保养维护方面。
色谱柱大家都不陌生,是我们做分析的必需品,无论是液相色谱仪还是气相色谱仪都离不开色谱柱。色谱柱是化合物分离的关键,我们在安装时要保证阀件管路的清洁,并且不能碰撞、弯曲或强烈震荡色谱柱,在长期不使用色谱柱的时候要用保存封闭,分析结束后要用流动相或适当的溶剂清洗色谱柱,流动相在使用前必须进行脱气处理,尽量不使用或少使用高粘度的流动相,在满足灵敏度的前提下,尽可能的使用小进样量。如果样品比较脏,要进行净化或提纯处理。进样器是液相色谱仪的主要部分之一,我们也要定期进行维护工作。液相色谱仪的检测器在每次分析完成要立即关闭。 泵是液相色谱仪的心脏,我们要定期维护保养,这样才能使得其处于状态,能报保证基线平稳,保留时间重现性好,梯度洗脱时压力变化缓慢而且平稳。以前填料纯化技术不是很成熟,十八烷基键合到硅胶表面不是很完全,硅胶上总是少量的硅羟基在外面。
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