做亲和柱时,使用Sepharose 4B 和 Sepharose CL-4B有何不同?
Sepharose 4B指4%的琼脂糖
Sepharose CL-4B指4%高度铰链的琼脂糖
他们的区别在于铰链程度不一样,在亲和层析色谱中,介质铰链程度越高,化学稳定性就应该越高。这样就可以耐受更加苛刻条件洗脱而偶联的配基不会脱落。越是硬质的介质,耐受的流速也会越高。这样
呕吐毒素亲和柱公司
做亲和柱时,使用Sepharose 4B 和 Sepharose CL-4B有何不同?
Sepharose 4B指4%的琼脂糖
Sepharose CL-4B指4%高度铰链的琼脂糖
他们的区别在于铰链程度不一样,在亲和层析色谱中,介质铰链程度越高,化学稳定性就应该越高。这样就可以耐受更加苛刻条件洗脱而偶联的配基不会脱落。越是硬质的介质,耐受的流速也会越高。这样更节省平衡洗脱的时间。
亲和柱的适用范围
亲和柱,适用于基质复杂、要求低的样品中真菌毒素检测的净化。亲和柱中含有抗体,能够结合萃取液中目标真菌毒素。在净化过程中干扰物质从柱上淋洗下来,而目标真菌毒素能够固定在柱上,之后通过适当溶剂将目标真菌毒素从亲和柱上洗脱下来,实现了毒素与杂质的分离。
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亲和柱净化步骤
注意:整个纯化过程尽量不要让柱子干燥!
----3mL柱管取出上方堵头,减去上堵头螺纹下突出部分,插回柱子上,另一端与20mL针筒固定后使用;将1mL柱管上方堵头取出后斜剪断,然后再插回柱子上(柱管内偶见有小气泡属正常现象,不影响亲和柱的使用);
----准确移取上述混匀滤液,注入针筒中,调节针筒压力使其以2秒/滴的速度缓慢通过亲和柱;
----用20mL 水冲洗柱子(对于饲料及玉米加工副产品等颜色较深的样液,先用10mL 0.1%吐温20-PBS清洗,再用10 mL 10%水冲洗柱子,之后用10mL水冲洗柱子。),流速1秒/滴,弃去流出液,直至2~3mL空气通过柱体,保证柱子内没有残余液体;
----准确加入1.5mL(色谱级)洗脱,流速自然重力,直至2~3mL空气通过柱体,保证柱子内没有残余液体。收集全部洗脱液,进行相关测定。
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