武汉纽斯特生物科技有限公司(WuhanNewEastBiotechonologyCo.Ltd),系美国生命科学试剂供应商美国NewEastBio在的子公司。公司位于武汉东湖高新技术开发区光谷生物城.美国NewEastBio专注于生命科学和生物技术领域,主要产品有小分子、ELISA试剂盒、蛋白等,与世界高校和研究所、世界大制药公司、生物科技公司和医院等客户建立了长
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武汉纽斯特生物科技有限公司(WuhanNewEastBiotechonologyCo.Ltd),系美国生命科学试剂供应商美国NewEastBio在的子公司。公司位于武汉东湖高新技术开发区光谷生物城.美国NewEastBio专注于生命科学和生物技术领域,主要产品有小分子、ELISA试剂盒、蛋白等,与世界高校和研究所、世界大制药公司、生物科技公司和医院等客户建立了长期稳定的合作关系,产品销往。
产品描述
ARF6(ADP-核糖基化因子6)是ARF超家族的成员。 ARF基因编码小的GTPases,它们会增加霍l乱毒l素的ADP-核糖基转移酶活性,并且对于作为磷脂酶D的激l活剂的囊泡运输至关重要。Alf6调节膜运输并起吞噬作用的调节分子的作用。
试剂制备
1X Assay/Lysis Buffer:实验前用去离子水将5X的Assay/Lysis缓冲液稀释成1X的缓冲液,并在使用前加入蛋白酶抑制l剂如1 mM PMSF, 10 μg/mL leupeptin(亮肽素),或 10 μg/mL aprotinin(抑肽酶)。
样品处理
贴壁细胞
1. 培养细胞密度达到大约80%-90%之间(直径10 cm培养皿,~107个细胞),并用活性剂或抑制l剂进行处理。
2. 吸去培养基并用冰冷的PBS洗涤两次。
3. 向细胞中加入1X Assay/Lysis缓冲液(每个直径10cm的组织培养皿中加入0.5-1mL)。
4. 将培养皿放置于冰上处理10-20分钟。
5. 用细胞刮棒把细胞从培养皿下分离下来。
6. 将细胞裂解物转入合适的管中并放置于冰上。
7. 如果核发生裂解,细胞裂解物可能会变得非常的粘稠并且难以吸取。当这种情况出现时,将细胞裂解物用27的注射l器针头来回吸取3-4次,以破坏基因组DNA,从而避免上述情况的出现。
8. 4°C 12000 g, 离心10 min。
9. 收集上清(~1-2 mg总蛋白)并放置于冰上使用。如果样品不立即使用,请将处理后的样品存放于-70°C条件下。
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